植物保护
植物保護
식물보호
PLANT PROTECTION
2010年
6期
16-20
,共5页
苏宏华%王桂荣%吴孔明%张永军%梁革梅%郭予元
囌宏華%王桂榮%吳孔明%張永軍%樑革梅%郭予元
소굉화%왕계영%오공명%장영군%량혁매%곽여원
Gqα%内含子%棉铃虫%抗性%原核表达
Gqα%內含子%棉鈴蟲%抗性%原覈錶達
Gqα%내함자%면령충%항성%원핵표체
为了阐明Gqα的DNA序列情况,分别以cDNA和总DNA为模板,对Gqα进行PCR扩增,结果发现,Gqα在DNA水平上没有内含子.为了了解不同棉铃虫品系Gqα的变异情况,以实验室5个棉铃虫品系的中肠总DNA为模板,使用Pyrobest高保真酶对该基因进行扩增,测序后翻译成氨基酸序列发现,田间的耐药性品系只有2个氨基酸的变异,即:第163位的非极性A(丙氨酸)变成了极性T(苏氨酸);第353位的非极性V(缬氨酸)变成了碱性R(精氨酸);实验室内毒蛋白品系只有一个氨基酸的变异,第353位的V变成了R;其他2种实验室品系没有任何氨基酸的变异.个别氨基酸的变异可能与棉铃虫对Bt毒素产生抗性相关.将Gqα编码区克隆到表达载体pET21b中,表达出带有6个组氨酸标签的重组蛋白并对其进行了纯化,为进一步研究其功能奠定了基础.
為瞭闡明Gqα的DNA序列情況,分彆以cDNA和總DNA為模闆,對Gqα進行PCR擴增,結果髮現,Gqα在DNA水平上沒有內含子.為瞭瞭解不同棉鈴蟲品繫Gqα的變異情況,以實驗室5箇棉鈴蟲品繫的中腸總DNA為模闆,使用Pyrobest高保真酶對該基因進行擴增,測序後翻譯成氨基痠序列髮現,田間的耐藥性品繫隻有2箇氨基痠的變異,即:第163位的非極性A(丙氨痠)變成瞭極性T(囌氨痠);第353位的非極性V(纈氨痠)變成瞭堿性R(精氨痠);實驗室內毒蛋白品繫隻有一箇氨基痠的變異,第353位的V變成瞭R;其他2種實驗室品繫沒有任何氨基痠的變異.箇彆氨基痠的變異可能與棉鈴蟲對Bt毒素產生抗性相關.將Gqα編碼區剋隆到錶達載體pET21b中,錶達齣帶有6箇組氨痠標籤的重組蛋白併對其進行瞭純化,為進一步研究其功能奠定瞭基礎.
위료천명Gqα적DNA서렬정황,분별이cDNA화총DNA위모판,대Gqα진행PCR확증,결과발현,Gqα재DNA수평상몰유내함자.위료료해불동면령충품계Gqα적변이정황,이실험실5개면령충품계적중장총DNA위모판,사용Pyrobest고보진매대해기인진행확증,측서후번역성안기산서렬발현,전간적내약성품계지유2개안기산적변이,즉:제163위적비겁성A(병안산)변성료겁성T(소안산);제353위적비겁성V(힐안산)변성료감성R(정안산);실험실내독단백품계지유일개안기산적변이,제353위적V변성료R;기타2충실험실품계몰유임하안기산적변이.개별안기산적변이가능여면령충대Bt독소산생항성상관.장Gqα편마구극륭도표체재체pET21b중,표체출대유6개조안산표첨적중조단백병대기진행료순화,위진일보연구기공능전정료기출.
