CAJ | 학술논문

背景:作者前期研究发现一个在破骨细胞形成中起关键作用的基因,其在细胞之间相互识别及膜融合中发挥关键作用.目的:采用Gateway的非放射标记技术构建小鼠破骨细胞早期形成细胞的cDNA基因文库,并检测文库质量.方法:采集C57BL/6小鼠长骨骨髓,收集贴壁的骨髓单核细胞,加入巨噬细胞集落刺激因子和RANKL诱导形成破骨细胞,在巨噬细胞开始融合至形成破骨细胞的不同阶段开始收集细胞,提取总RNA,用CloneMiner TM cDNA文库构建试剂盒,采用非放射标记方法构建小鼠破骨细胞全长cDNA文库.结果与结论:构建的小鼠骨髓巨噬细胞cDNA文库滴度为2.15×107 CFU/ mL,库容量为10.5×107 CFU,重组率为100%,重组子插入cDNA平均片段大小约为1.7 kb,范围为0.1~5.8 kb.表明非放射标记法构建同样可以构建小鼠骨髓巨噬细胞全长cDNA质粒文库,避免了放射性物质的接触,且文库质量良好.
배경:작자전기연구발현일개재파골세포형성중기관건작용적기인,기재세포지간상호식별급막융합중발휘관건작용.목적:채용Gateway적비방사표기기술구건소서파골세포조기형성세포적cDNA기인문고,병검측문고질량.방법:채집C57BL/6소서장골골수,수집첩벽적골수단핵세포,가입거서세포집락자격인자화RANKL유도형성파골세포,재거서세포개시융합지형성파골세포적불동계단개시수집세포,제취총RNA,용CloneMiner TM cDNA문고구건시제합,채용비방사표기방법구건소서파골세포전장cDNA문고.결과여결론:구건적소서골수거서세포cDNA문고적도위2.15×107 CFU/ mL,고용량위10.5×107 CFU,중조솔위100%,중조자삽입cDNA평균편단대소약위1.7 kb,범위위0.1~5.8 kb.표명비방사표기법구건동양가이구건소서골수거서세포전장cDNA질립문고,피면료방사성물질적접촉,차문고질량량호.