畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
10期
1485-1490
,共6页
吴锦艳%田宏%尚佑军%陈妍%魏衍全%侯相民%赵娜%何建辉%刘湘涛
吳錦豔%田宏%尚祐軍%陳妍%魏衍全%侯相民%趙娜%何建輝%劉湘濤
오금염%전굉%상우군%진연%위연전%후상민%조나%하건휘%류상도
猪繁殖与呼吸综合征病毒%一步多重RT-PCR%检测方法
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%一步多重RT-PCR%檢測方法
저번식여호흡종합정병독%일보다중RT-PCR%검측방법
本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法.通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490 bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒和组织毒、田间样品及临床症状相似的疾病猪瘟和猪伪狂犬病毒做了检测；并对田间及实验室样品进行符合率试验,对阳性样品进行重复性试验.与常规RT-PCR法进行比较,证明该方法比常规RT-PCR法敏感性提高了10倍；而且利用该方法可使检测时间大大缩短；特异性试验证实该方法无交叉反应；阳性和阴性样本的符合率均为100％；3次阳性样品重复性检测结果完全相同；稳定性试验显示该试剂盒至少可保存1年以上.本研究所建立的PRRSV一步多重RT-PCR检测方法的敏感性高、特异性强、操作简便、省时、结果重复性好,不仅适用于临床病例尤其低微含量样品的诊断,而且在筛查隐形带毒动物及兽医检疫方面具有重要的应用价值.
本研究旨在建立豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR檢測方法.通過多序列比對以及反應條件的優化,從4對引物中精選瞭3對特異性和敏感性較好、擴增片段分彆為228、345和490 bp的引物,併應用所建立的方法對4種分離株的細胞毒和組織毒、田間樣品及臨床癥狀相似的疾病豬瘟和豬偽狂犬病毒做瞭檢測；併對田間及實驗室樣品進行符閤率試驗,對暘性樣品進行重複性試驗.與常規RT-PCR法進行比較,證明該方法比常規RT-PCR法敏感性提高瞭10倍；而且利用該方法可使檢測時間大大縮短；特異性試驗證實該方法無交扠反應；暘性和陰性樣本的符閤率均為100％；3次暘性樣品重複性檢測結果完全相同；穩定性試驗顯示該試劑盒至少可保存1年以上.本研究所建立的PRRSV一步多重RT-PCR檢測方法的敏感性高、特異性彊、操作簡便、省時、結果重複性好,不僅適用于臨床病例尤其低微含量樣品的診斷,而且在篩查隱形帶毒動物及獸醫檢疫方麵具有重要的應用價值.
본연구지재건립저번식여호흡종합정병독(PRRSV)적일보다중RT-PCR검측방법.통과다서렬비대이급반응조건적우화,종4대인물중정선료3대특이성화민감성교호、확증편단분별위228、345화490 bp적인물,병응용소건립적방법대4충분리주적세포독화조직독、전간양품급림상증상상사적질병저온화저위광견병독주료검측；병대전간급실험실양품진행부합솔시험,대양성양품진행중복성시험.여상규RT-PCR법진행비교,증명해방법비상규RT-PCR법민감성제고료10배；이차이용해방법가사검측시간대대축단；특이성시험증실해방법무교차반응；양성화음성양본적부합솔균위100％；3차양성양품중복성검측결과완전상동；은정성시험현시해시제합지소가보존1년이상.본연구소건립적PRRSV일보다중RT-PCR검측방법적민감성고、특이성강、조작간편、성시、결과중복성호,불부괄용우림상병례우기저미함량양품적진단,이차재사사은형대독동물급수의검역방면구유중요적응용개치.
