CAJ | 학술논문

为建立牛皮蝇蛆病的抗体检测方法,本研究从纹皮蝇I期幼虫中提取总RNA,采用RT-PCR扩增了Hypodermin C(HC)基因.将该基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+)中进行原核表达.获得了31ku以包涵体形式表达的重组HC蛋白.Western blot结果表明表达产物能够与阳性牛血清IgG特异性结合,具有良好的抗原活性.以纯化的重组HC作为包被抗原建立了牛皮蝇蛆病间接ELISA诊断方法,实验确定抗原最佳包被浓度为15.63 μg/mL,血清最佳稀释度为1:80,阳性标准判定为待检血清OD值＞0.256.所建立的诊断方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性.应用该检测方法对230份临床血清进行检测,阳性率为20.6％.研究结果表明该间接ELISA方法是一种有效的牛皮蝇蛆病血清学检测方法.
위건립우피승저병적항체검측방법,본연구종문피승I기유충중제취총RNA,채용RT-PCR확증료Hypodermin C(HC)기인.장해기인편단삽입도원핵표체재체pET-30a(+)중진행원핵표체.획득료31ku이포함체형식표체적중조HC단백.Western blot결과표명표체산물능구여양성우혈청IgG특이성결합,구유량호적항원활성.이순화적중조HC작위포피항원건립료우피승저병간접ELISA진단방법,실험학정항원최가포피농도위15.63 μg/mL,혈청최가희석도위1:80,양성표준판정위대검혈청OD치＞0.256.소건립적진단방법구유교호적특이성、민감성화가중복성.응용해검측방법대230빈림상혈청진행검측,양성솔위20.6％.연구결과표명해간접ELISA방법시일충유효적우피승저병혈청학검측방법.