畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
4期
62-65
,共4页
孙彦欣%左玉柱%李建辉%范京惠
孫彥訢%左玉柱%李建輝%範京惠
손언흔%좌옥주%리건휘%범경혜
猪细小病毒%猪圆环病毒%VP2基因%P21基因%原核表达
豬細小病毒%豬圓環病毒%VP2基因%P21基因%原覈錶達
저세소병독%저원배병독%VP2기인%P21기인%원핵표체
猪细小病毒与猪圆环病毒的混合感染较为普遍,给养猪业造成了较大的经济损失.从河北省部分地区病猪中分离猪细小病毒,通过PCR 技术获得VP2蛋白的编码基因,采用PCR技术对猪圆环病毒的多肽P21基因进行扩增.分别将其连入Simple-T载体中,经酶切、PCR及序列测定法进行鉴定.测序正确后,将VP2基因与多肽P21基因插入到pET-32a(+)载体中构建原核表达载体.将此重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中,并用IPTC诱导,诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot可检测到分子量约为85 ku的目的蛋白,结果显示VP2基因与P21基因可以在大肠杆菌中获联合表达.Western -blot试验证明,该蛋白可以与猪细小病毒免疫血清以及猪圆环病毒免疫血清产生特异性结合反应,具有良好的反应原性.
豬細小病毒與豬圓環病毒的混閤感染較為普遍,給養豬業造成瞭較大的經濟損失.從河北省部分地區病豬中分離豬細小病毒,通過PCR 技術穫得VP2蛋白的編碼基因,採用PCR技術對豬圓環病毒的多肽P21基因進行擴增.分彆將其連入Simple-T載體中,經酶切、PCR及序列測定法進行鑒定.測序正確後,將VP2基因與多肽P21基因插入到pET-32a(+)載體中構建原覈錶達載體.將此重組質粒轉化到大腸桿菌BL21感受態細胞中,併用IPTC誘導,誘導產物用SDS-PAGE和Western-blot可檢測到分子量約為85 ku的目的蛋白,結果顯示VP2基因與P21基因可以在大腸桿菌中穫聯閤錶達.Western -blot試驗證明,該蛋白可以與豬細小病毒免疫血清以及豬圓環病毒免疫血清產生特異性結閤反應,具有良好的反應原性.
저세소병독여저원배병독적혼합감염교위보편,급양저업조성료교대적경제손실.종하북성부분지구병저중분리저세소병독,통과PCR 기술획득VP2단백적편마기인,채용PCR기술대저원배병독적다태P21기인진행확증.분별장기련입Simple-T재체중,경매절、PCR급서렬측정법진행감정.측서정학후,장VP2기인여다태P21기인삽입도pET-32a(+)재체중구건원핵표체재체.장차중조질립전화도대장간균BL21감수태세포중,병용IPTC유도,유도산물용SDS-PAGE화Western-blot가검측도분자량약위85 ku적목적단백,결과현시VP2기인여P21기인가이재대장간균중획연합표체.Western -blot시험증명,해단백가이여저세소병독면역혈청이급저원배병독면역혈청산생특이성결합반응,구유량호적반응원성.
