中国中西医结合肾病杂志
中國中西醫結閤腎病雜誌
중국중서의결합신병잡지
CHINESE JOURNAL OF INTEGRATED TRADITIONAL AND WESTERN NEPHROLOGY
2012年
5期
387-390
,共4页
古艳婷%孙斯凡%李平%董晞%王红盼%赵婷婷%张浩军%杨靖
古豔婷%孫斯凡%李平%董晞%王紅盼%趙婷婷%張浩軍%楊靖
고염정%손사범%리평%동희%왕홍반%조정정%장호군%양정
ETFβ%NADPH氧化酶%HEK293%糖尿病肾病
ETFβ%NADPH氧化酶%HEK293%糖尿病腎病
ETFβ%NADPH양화매%HEK293%당뇨병신병
目的 构建大鼠ETFβ的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达和对NADPH氧化酶的影响.方法 应用RT-PCR方法从大鼠肾脏组织总RNA中扩增出编码ETFβ的cDNA,克隆至pUM-T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定后测序,测序正确后用磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,使用RT-PCR方法检测空载体组和重组质粒转染组的NADPH氧化酶各亚基mRNA水平的表达变化.结果 (1)测序结果证实PCR扩增得到编码ETFβ的cDNA序列正确;(2)磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,ETFβ融合蛋白成功表达;(3)RT-PCR结果显示重组质粒转染组的NADPH氧化酶5个亚基中的NOX3,NOX4的mRNA表达降低(P<0.05),空载体组和重组质粒转染组之间比较NOX1,NOX2,NOX5的mRNA表达差异无统计学意义.结论 成功构建大鼠ETFβ的重组质粒,该重组质粒可在HEK 293T中过表达,并且降低了NADPH氧化酶NOX3,NOX4的mRNA表达水平.
目的 構建大鼠ETFβ的重組質粒併檢測其在人胚胎腎293T細胞中的錶達和對NADPH氧化酶的影響.方法 應用RT-PCR方法從大鼠腎髒組織總RNA中擴增齣編碼ETFβ的cDNA,剋隆至pUM-T載體併測序,然後亞剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1/V5-His,酶切鑒定後測序,測序正確後用燐痠鈣共沉澱法瞬時轉染HEK293T細胞,使用RT-PCR方法檢測空載體組和重組質粒轉染組的NADPH氧化酶各亞基mRNA水平的錶達變化.結果 (1)測序結果證實PCR擴增得到編碼ETFβ的cDNA序列正確;(2)燐痠鈣共沉澱法轉染HEK293T細胞後,ETFβ融閤蛋白成功錶達;(3)RT-PCR結果顯示重組質粒轉染組的NADPH氧化酶5箇亞基中的NOX3,NOX4的mRNA錶達降低(P<0.05),空載體組和重組質粒轉染組之間比較NOX1,NOX2,NOX5的mRNA錶達差異無統計學意義.結論 成功構建大鼠ETFβ的重組質粒,該重組質粒可在HEK 293T中過錶達,併且降低瞭NADPH氧化酶NOX3,NOX4的mRNA錶達水平.
목적 구건대서ETFβ적중조질립병검측기재인배태신293T세포중적표체화대NADPH양화매적영향.방법 응용RT-PCR방법종대서신장조직총RNA중확증출편마ETFβ적cDNA,극륭지pUM-T재체병측서,연후아극륭지진핵표체재체pcDNA3.1/V5-His,매절감정후측서,측서정학후용린산개공침정법순시전염HEK293T세포,사용RT-PCR방법검측공재체조화중조질립전염조적NADPH양화매각아기mRNA수평적표체변화.결과 (1)측서결과증실PCR확증득도편마ETFβ적cDNA서렬정학;(2)린산개공침정법전염HEK293T세포후,ETFβ융합단백성공표체;(3)RT-PCR결과현시중조질립전염조적NADPH양화매5개아기중적NOX3,NOX4적mRNA표체강저(P<0.05),공재체조화중조질립전염조지간비교NOX1,NOX2,NOX5적mRNA표체차이무통계학의의.결론 성공구건대서ETFβ적중조질립,해중조질립가재HEK 293T중과표체,병차강저료NADPH양화매NOX3,NOX4적mRNA표체수평.
