中华骨科杂志
中華骨科雜誌
중화골과잡지
CHINESE JOURNAL OF ORTHOPAEDICS
2006年
11期
769-772
,共4页
赵冬梅%杨加峰%刘军莉%王海斌%许复郁%武士清%贾玉秀
趙鼕梅%楊加峰%劉軍莉%王海斌%許複鬱%武士清%賈玉秀
조동매%양가봉%류군리%왕해빈%허복욱%무사청%가옥수
基因%转染%血管内皮生长因子类%免疫组织化学
基因%轉染%血管內皮生長因子類%免疫組織化學
기인%전염%혈관내피생장인자류%면역조직화학
目的 构建pcDNA3.1-VEGF165质粒,观察其对骨缺损修复的影响.方法 用Trizol法提取兔骨组织中总RNA,反转录合成VEGF165 cDNA序列,与 pMD18-T构建真核表达载体,再与pcDNA3.1载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1-VEGF165.取28只新西兰大白兔制备双侧桡骨骨缺损(10mm)模型.实验侧局部直接注射质粒液0.2ml(含质粒200ng),对照侧注射等量生理盐水.标本于术后1、2、4、6、8和12周摄X线片后取材.以HE染色法、免疫组化染色法观察局部组织的修复情况及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达.结果 pcDNA3.1-VEGF165构建成功,测序正确.X线摄片观察于第2周开始两组出现区别.HE染色显示术后2周两组缺损区组织炎性细胞浸润;4周开始实验组成骨细胞大量增殖、骨小梁形成;12周时实验组骨缺损修复正常,对照组修复时间迟缓.免疫组化结果显示,术后8周及12周两组Ⅲ型胶原及Ⅰ型胶原均有阳性表达,实验组表达较强.结论 应用pcDNA3.1-VEGF165质粒直接转染骨缺损局部组织细胞,具有增加局部Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达、加快骨缺损修复的作用.
目的 構建pcDNA3.1-VEGF165質粒,觀察其對骨缺損脩複的影響.方法 用Trizol法提取兔骨組織中總RNA,反轉錄閤成VEGF165 cDNA序列,與 pMD18-T構建真覈錶達載體,再與pcDNA3.1載體構建成重組真覈錶達質粒pcDNA3.1-VEGF165.取28隻新西蘭大白兔製備雙側橈骨骨缺損(10mm)模型.實驗側跼部直接註射質粒液0.2ml(含質粒200ng),對照側註射等量生理鹽水.標本于術後1、2、4、6、8和12週攝X線片後取材.以HE染色法、免疫組化染色法觀察跼部組織的脩複情況及Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原的錶達.結果 pcDNA3.1-VEGF165構建成功,測序正確.X線攝片觀察于第2週開始兩組齣現區彆.HE染色顯示術後2週兩組缺損區組織炎性細胞浸潤;4週開始實驗組成骨細胞大量增殖、骨小樑形成;12週時實驗組骨缺損脩複正常,對照組脩複時間遲緩.免疫組化結果顯示,術後8週及12週兩組Ⅲ型膠原及Ⅰ型膠原均有暘性錶達,實驗組錶達較彊.結論 應用pcDNA3.1-VEGF165質粒直接轉染骨缺損跼部組織細胞,具有增加跼部Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原錶達、加快骨缺損脩複的作用.
목적 구건pcDNA3.1-VEGF165질립,관찰기대골결손수복적영향.방법 용Trizol법제취토골조직중총RNA,반전록합성VEGF165 cDNA서렬,여 pMD18-T구건진핵표체재체,재여pcDNA3.1재체구건성중조진핵표체질립pcDNA3.1-VEGF165.취28지신서란대백토제비쌍측뇨골골결손(10mm)모형.실험측국부직접주사질립액0.2ml(함질립200ng),대조측주사등량생리염수.표본우술후1、2、4、6、8화12주섭X선편후취재.이HE염색법、면역조화염색법관찰국부조직적수복정황급Ⅰ형효원、Ⅲ형효원적표체.결과 pcDNA3.1-VEGF165구건성공,측서정학.X선섭편관찰우제2주개시량조출현구별.HE염색현시술후2주량조결손구조직염성세포침윤;4주개시실험조성골세포대량증식、골소량형성;12주시실험조골결손수복정상,대조조수복시간지완.면역조화결과현시,술후8주급12주량조Ⅲ형효원급Ⅰ형효원균유양성표체,실험조표체교강.결론 응용pcDNA3.1-VEGF165질립직접전염골결손국부조직세포,구유증가국부Ⅰ형효원화Ⅲ형효원표체、가쾌골결손수복적작용.
