华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2005年
1期
33-36
,共4页
蔡晓坤%林菊生%刘址忠%薛秀兰%梁扩寰
蔡曉坤%林菊生%劉阯忠%薛秀蘭%樑擴寰
채효곤%림국생%류지충%설수란%량확환
PNP/Mep-dR系统%CMV启动子%AF0.3启动子%基因表达%肝细胞癌
PNP/Mep-dR繫統%CMV啟動子%AF0.3啟動子%基因錶達%肝細胞癌
PNP/Mep-dR계통%CMV계동자%AF0.3계동자%기인표체%간세포암
目的分别构建巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)通用启动子和甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)组织特异性启动子调控的PNP基因表达载体并分析二者表达的差异性.方法将AF0.3启动子插入载体pcDNA3.0, 构建肝癌细胞特异表达载体pAF0.3;将PNP基因分别插入到pcDNA3.0和pAF0.3 中,构建不同启动子调控下的PNP基因表达载体pcDNA3.0/PNP和pAF0.3/PNP;通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体.采用脂质体介导法将两种PNP基因表达载体转染不同的细胞株,RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中的表达,分析二者表达的不同.结果各目的片段均成功插入相应的载体中,CMV启动子调控下的PNP基因在各株细胞中均实现了表达,而AF0.3启动子调控下的PNP基因则在AFP阳性肝癌细胞中实现了组织特异性表达.结论两PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体,且pAF0.3/PNP还实现了在AFP阳性肝癌细胞中的靶向性表达.
目的分彆構建巨細胞病毒(cytomegalovirus,CMV)通用啟動子和甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)組織特異性啟動子調控的PNP基因錶達載體併分析二者錶達的差異性.方法將AF0.3啟動子插入載體pcDNA3.0, 構建肝癌細胞特異錶達載體pAF0.3;將PNP基因分彆插入到pcDNA3.0和pAF0.3 中,構建不同啟動子調控下的PNP基因錶達載體pcDNA3.0/PNP和pAF0.3/PNP;通過酶切、PCR及測序鑒定各重組體.採用脂質體介導法將兩種PNP基因錶達載體轉染不同的細胞株,RT-PCR檢測PNP基因在各細胞株中的錶達,分析二者錶達的不同.結果各目的片段均成功插入相應的載體中,CMV啟動子調控下的PNP基因在各株細胞中均實現瞭錶達,而AF0.3啟動子調控下的PNP基因則在AFP暘性肝癌細胞中實現瞭組織特異性錶達.結論兩PNP基因錶達載體是肝癌基因治療中新型、高效的治療載體,且pAF0.3/PNP還實現瞭在AFP暘性肝癌細胞中的靶嚮性錶達.
목적분별구건거세포병독(cytomegalovirus,CMV)통용계동자화갑태단백(α-fetoprotein,AFP)조직특이성계동자조공적PNP기인표체재체병분석이자표체적차이성.방법장AF0.3계동자삽입재체pcDNA3.0, 구건간암세포특이표체재체pAF0.3;장PNP기인분별삽입도pcDNA3.0화pAF0.3 중,구건불동계동자조공하적PNP기인표체재체pcDNA3.0/PNP화pAF0.3/PNP;통과매절、PCR급측서감정각중조체.채용지질체개도법장량충PNP기인표체재체전염불동적세포주,RT-PCR검측PNP기인재각세포주중적표체,분석이자표체적불동.결과각목적편단균성공삽입상응적재체중,CMV계동자조공하적PNP기인재각주세포중균실현료표체,이AF0.3계동자조공하적PNP기인칙재AFP양성간암세포중실현료조직특이성표체.결론량PNP기인표체재체시간암기인치료중신형、고효적치료재체,차pAF0.3/PNP환실현료재AFP양성간암세포중적파향성표체.
