生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
8期
1480-1484
,共5页
张变玲%张儒%姬婧媛%薛柯%荆二勇%张展鹏%尉亚辉
張變玲%張儒%姬婧媛%薛柯%荊二勇%張展鵬%尉亞輝
장변령%장유%희청원%설가%형이용%장전붕%위아휘
人脂联素%重叠延伸PCR%巴斯德毕赤酵母%Southern blotting%Western blotting
人脂聯素%重疊延伸PCR%巴斯德畢赤酵母%Southern blotting%Western blotting
인지련소%중첩연신PCR%파사덕필적효모%Southern blotting%Western blotting
利用重叠延伸PCR法克隆出人脂联素基因,连接至克隆栽体pGEM-T中,转化大肠杆菌DH5α,通过测序对其进行序列分析后,进一步构建毕赤酵母表达载体pPIC3.5K-ADPN,通过电击法转化毕赤酵母GS115,转化的重组酵母茵用甲醇诱导外源基因表达.经PCR、Southern blotting鉴定,获得了重组毕赤酵母茵株;经甲醇诱导人脂联素基因表达,Western blotting杂交鉴定证明人脂联素基因已经在毕赤酵母中成功表达.结果表明重叠延伸PCR法准确方便克隆出人脂联素基因,在30℃,1%甲醇诱导48 h,人脂联素基因在巴斯德毕赤酵母中的表达最佳.
利用重疊延伸PCR法剋隆齣人脂聯素基因,連接至剋隆栽體pGEM-T中,轉化大腸桿菌DH5α,通過測序對其進行序列分析後,進一步構建畢赤酵母錶達載體pPIC3.5K-ADPN,通過電擊法轉化畢赤酵母GS115,轉化的重組酵母茵用甲醇誘導外源基因錶達.經PCR、Southern blotting鑒定,穫得瞭重組畢赤酵母茵株;經甲醇誘導人脂聯素基因錶達,Western blotting雜交鑒定證明人脂聯素基因已經在畢赤酵母中成功錶達.結果錶明重疊延伸PCR法準確方便剋隆齣人脂聯素基因,在30℃,1%甲醇誘導48 h,人脂聯素基因在巴斯德畢赤酵母中的錶達最佳.
이용중첩연신PCR법극륭출인지련소기인,련접지극륭재체pGEM-T중,전화대장간균DH5α,통과측서대기진행서렬분석후,진일보구건필적효모표체재체pPIC3.5K-ADPN,통과전격법전화필적효모GS115,전화적중조효모인용갑순유도외원기인표체.경PCR、Southern blotting감정,획득료중조필적효모인주;경갑순유도인지련소기인표체,Western blotting잡교감정증명인지련소기인이경재필적효모중성공표체.결과표명중첩연신PCR법준학방편극륭출인지련소기인,재30℃,1%갑순유도48 h,인지련소기인재파사덕필적효모중적표체최가.
