中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2009年
z2期
41-46
,共6页
蒋柳宏%郑有华%张志光%苏凯%匡世军
蔣柳宏%鄭有華%張誌光%囌凱%劻世軍
장류굉%정유화%장지광%소개%광세군
骨髓间充质干细胞%碱性成纤维细胞生长因子%基因转染%组织工程
骨髓間充質榦細胞%堿性成纖維細胞生長因子%基因轉染%組織工程
골수간충질간세포%감성성섬유세포생장인자%기인전염%조직공정
[目的]探讨作为组织工程种子细胞的骨髓间充质干细胞(BMSCs),在体外培养条件下bFGF基因转染对其生物学特性的影响.[方法]穿刺抽取新西兰大白兔胫骨骨髓,采用密度梯度离心法分离BMSCs,在采用贴壁筛选法对分离出的BMSCs进行纯化.将DH-5α菌(含牛bFGF-pcDNA3真核表达载体)扩增,用UNIQ-10柱式质粒小量抽提试剂盒抽提质粒,并对所提取的bFGF-pcDNA3重组表达质粒酶切鉴定.利用脂质体转染bFGF-pcDNA3到BMSCs,G418筛选获得抗性克隆.采用免疫组化、Western blot检测、MTT法检测和流式细胞仪检测转染bFGF的骨髓基质干细胞表达bFGF蛋白、细胞的增殖情况和细胞周期.[结果]密度梯度离心法和贴壁筛选法,获得大量形态均一的BMSCs,部分细胞经成骨诱导培养后,Von kossa染色可见黑色结节.脂质体介导bFGF-pcDNA3重组表达质粒转染BMSCs,经免疫组化和Western blot检测,证实转染细胞确实表达bFGF,并且表达部位在胞浆.转染细胞增值活力加强,生长曲线上移,处于增殖周期的细胞比例加大(P<0.05).[结论]用脂质体转染法能将bFGF-pcDNA3重组真核表达载体成功导人体外培养的BMSCs,筛选得到稳定表达bFGF的BMSCs细胞株,自身表达的bFGF可以促进BMSCs增殖.
[目的]探討作為組織工程種子細胞的骨髓間充質榦細胞(BMSCs),在體外培養條件下bFGF基因轉染對其生物學特性的影響.[方法]穿刺抽取新西蘭大白兔脛骨骨髓,採用密度梯度離心法分離BMSCs,在採用貼壁篩選法對分離齣的BMSCs進行純化.將DH-5α菌(含牛bFGF-pcDNA3真覈錶達載體)擴增,用UNIQ-10柱式質粒小量抽提試劑盒抽提質粒,併對所提取的bFGF-pcDNA3重組錶達質粒酶切鑒定.利用脂質體轉染bFGF-pcDNA3到BMSCs,G418篩選穫得抗性剋隆.採用免疫組化、Western blot檢測、MTT法檢測和流式細胞儀檢測轉染bFGF的骨髓基質榦細胞錶達bFGF蛋白、細胞的增殖情況和細胞週期.[結果]密度梯度離心法和貼壁篩選法,穫得大量形態均一的BMSCs,部分細胞經成骨誘導培養後,Von kossa染色可見黑色結節.脂質體介導bFGF-pcDNA3重組錶達質粒轉染BMSCs,經免疫組化和Western blot檢測,證實轉染細胞確實錶達bFGF,併且錶達部位在胞漿.轉染細胞增值活力加彊,生長麯線上移,處于增殖週期的細胞比例加大(P<0.05).[結論]用脂質體轉染法能將bFGF-pcDNA3重組真覈錶達載體成功導人體外培養的BMSCs,篩選得到穩定錶達bFGF的BMSCs細胞株,自身錶達的bFGF可以促進BMSCs增殖.
[목적]탐토작위조직공정충자세포적골수간충질간세포(BMSCs),재체외배양조건하bFGF기인전염대기생물학특성적영향.[방법]천자추취신서란대백토경골골수,채용밀도제도리심법분리BMSCs,재채용첩벽사선법대분리출적BMSCs진행순화.장DH-5α균(함우bFGF-pcDNA3진핵표체재체)확증,용UNIQ-10주식질립소량추제시제합추제질립,병대소제취적bFGF-pcDNA3중조표체질립매절감정.이용지질체전염bFGF-pcDNA3도BMSCs,G418사선획득항성극륭.채용면역조화、Western blot검측、MTT법검측화류식세포의검측전염bFGF적골수기질간세포표체bFGF단백、세포적증식정황화세포주기.[결과]밀도제도리심법화첩벽사선법,획득대량형태균일적BMSCs,부분세포경성골유도배양후,Von kossa염색가견흑색결절.지질체개도bFGF-pcDNA3중조표체질립전염BMSCs,경면역조화화Western blot검측,증실전염세포학실표체bFGF,병차표체부위재포장.전염세포증치활력가강,생장곡선상이,처우증식주기적세포비례가대(P<0.05).[결론]용지질체전염법능장bFGF-pcDNA3중조진핵표체재체성공도인체외배양적BMSCs,사선득도은정표체bFGF적BMSCs세포주,자신표체적bFGF가이촉진BMSCs증식.
