CAJ | 학술논문

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)有性生殖决定着菌核病的初侵染及流行程度,有性生殖过程中的交配型基因对该菌的性别控制和遗传进化起着决定性作用,为揭示核盘菌有性生殖的分子机制,本研究对核盘菌的交配型基因MAT-2进行了克隆、序列分析及其原核表达的研究.根据GenBank中核盘菌MAT-2基因(DQ159959)序列设计引物,提取该菌总RNA,采用Reverse Transcription-PCR(RT-PCR)的方法扩增交配型基因MAT-2,对其进行序列分析,构建其原核表达载体,并转化至大肠杆菌BL21中进行原核表达.以反转录产物为模板,扩增出1185bp的MAT-2基因片段(命名为MAT-2-JL),通过测序及序列分析,结果表明,与GenBank中不同真菌的交配型基因核苷酸序列的同源性为26.6%～98.8%,推导的氨基酸序列同源性为12.0%～98.8%.根据完整的MAT-2基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:不同菌株的24个交配型基因可分为2组,其中MAT-2-JL与黄色镰孢菌(Fusarium culmorum)和滕仓赤霉菌(Gibberella fujikuroi)MAT-2等属于组I.将MAT-2-JL基因与原核表达载体pET28a连接,在大肠杆菌BL21中诱导表达出分子量约48.2 kD的融合蛋白.
핵반균(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)유성생식결정착균핵병적초침염급류행정도,유성생식과정중적교배형기인대해균적성별공제화유전진화기착결정성작용,위게시핵반균유성생식적분자궤제,본연구대핵반균적교배형기인MAT-2진행료극륭、서렬분석급기원핵표체적연구.근거GenBank중핵반균MAT-2기인(DQ159959)서렬설계인물,제취해균총RNA,채용Reverse Transcription-PCR(RT-PCR)적방법확증교배형기인MAT-2,대기진행서렬분석,구건기원핵표체재체,병전화지대장간균BL21중진행원핵표체.이반전록산물위모판,확증출1185bp적MAT-2기인편단(명명위MAT-2-JL),통과측서급서렬분석,결과표명,여GenBank중불동진균적교배형기인핵감산서렬적동원성위26.6%～98.8%,추도적안기산서렬동원성위12.0%～98.8%.근거완정적MAT-2기인핵감산서렬구건적계통진화수현시:불동균주적24개교배형기인가분위2조,기중MAT-2-JL여황색렴포균(Fusarium culmorum)화등창적매균(Gibberella fujikuroi)MAT-2등속우조I.장MAT-2-JL기인여원핵표체재체pET28a련접,재대장간균BL21중유도표체출분자량약48.2 kD적융합단백.