中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2011年
6期
437-444
,共8页
赵晔%胡占英%佟军威%赵立勋%蒋建东%张靖溥
趙曄%鬍佔英%佟軍威%趙立勛%蔣建東%張靖溥
조엽%호점영%동군위%조립훈%장건동%장정부
肝炎病毒属%斑马鱼%疾病模型,动物%基因表达
肝炎病毒屬%斑馬魚%疾病模型,動物%基因錶達
간염병독속%반마어%질병모형,동물%기인표체
目的 建立HCV非结构蛋白NS5A基因在斑马鱼肝脏特异表达的模型,研究HCV NS5A的体内作用机制并初步探讨HCV NS5A对肝病理标志基因表达的影响.方法 克隆肝基因表达调控序列——斑马鱼脂肪酸结合蛋白基因增强子序列(eFABP)和HCV非结构蛋白基因NS5A序列,利用CMV启动子序列,构建HCV NS5A基因和报告基因绿色荧光蛋白基因eGFP在肝脏共表达的基因构件pFC-5AiR.经细胞转染实验验证所建构件的报告基因DsRed表达红色荧光蛋白后,将该基因构件线性化并经显微注射导入斑马鱼胚胎;通过荧光显微镜观察和整体原位杂交技术对目的基因NSSA的表达进行定位,验证其肝脏特异性表达.采用RT-PCR方法和western blot方法对HCV NS5A基因的转录和翻译水平进行检测;并检测肝脏病理相关的标志基因的转录水平变化.结果 细胞转染实验证明基因构件pFC-5AiR的报告基因DsRed能够在肝癌细胞Huh7中表达;斑马鱼胚胎注射该基因构件后在肝脏能够观察到红色荧光蛋白基因DsRed的表达;RT-PCR和western blot结果显示HCV基因NS5A能够在斑马鱼体内正确表达;原位杂交结果进一步证明了NS5A的表达集中在斑马鱼肝脏内.进一步RT-PCR检测表明HCV NS5A在斑马鱼体内的表达可导致一些肝代谢和纤维化相关基因的上调,如Adiponectin、LDLR、Argsyn、TGF-β和HMGR等,推测NS5A在肝脏脂肪病变和纤维化中具有一定作用.结论 成功建立了斑马鱼肝脏表达HCV NS5A的模型;初步数据表明HCV NS5A在斑马鱼体内的表达与部分肝代谢和纤维化标志基因的异常表达相关;该模型可以用于HCV NS5A的体内病理机制的研究.
目的 建立HCV非結構蛋白NS5A基因在斑馬魚肝髒特異錶達的模型,研究HCV NS5A的體內作用機製併初步探討HCV NS5A對肝病理標誌基因錶達的影響.方法 剋隆肝基因錶達調控序列——斑馬魚脂肪痠結閤蛋白基因增彊子序列(eFABP)和HCV非結構蛋白基因NS5A序列,利用CMV啟動子序列,構建HCV NS5A基因和報告基因綠色熒光蛋白基因eGFP在肝髒共錶達的基因構件pFC-5AiR.經細胞轉染實驗驗證所建構件的報告基因DsRed錶達紅色熒光蛋白後,將該基因構件線性化併經顯微註射導入斑馬魚胚胎;通過熒光顯微鏡觀察和整體原位雜交技術對目的基因NSSA的錶達進行定位,驗證其肝髒特異性錶達.採用RT-PCR方法和western blot方法對HCV NS5A基因的轉錄和翻譯水平進行檢測;併檢測肝髒病理相關的標誌基因的轉錄水平變化.結果 細胞轉染實驗證明基因構件pFC-5AiR的報告基因DsRed能夠在肝癌細胞Huh7中錶達;斑馬魚胚胎註射該基因構件後在肝髒能夠觀察到紅色熒光蛋白基因DsRed的錶達;RT-PCR和western blot結果顯示HCV基因NS5A能夠在斑馬魚體內正確錶達;原位雜交結果進一步證明瞭NS5A的錶達集中在斑馬魚肝髒內.進一步RT-PCR檢測錶明HCV NS5A在斑馬魚體內的錶達可導緻一些肝代謝和纖維化相關基因的上調,如Adiponectin、LDLR、Argsyn、TGF-β和HMGR等,推測NS5A在肝髒脂肪病變和纖維化中具有一定作用.結論 成功建立瞭斑馬魚肝髒錶達HCV NS5A的模型;初步數據錶明HCV NS5A在斑馬魚體內的錶達與部分肝代謝和纖維化標誌基因的異常錶達相關;該模型可以用于HCV NS5A的體內病理機製的研究.
목적 건립HCV비결구단백NS5A기인재반마어간장특이표체적모형,연구HCV NS5A적체내작용궤제병초보탐토HCV NS5A대간병리표지기인표체적영향.방법 극륭간기인표체조공서렬——반마어지방산결합단백기인증강자서렬(eFABP)화HCV비결구단백기인NS5A서렬,이용CMV계동자서렬,구건HCV NS5A기인화보고기인록색형광단백기인eGFP재간장공표체적기인구건pFC-5AiR.경세포전염실험험증소건구건적보고기인DsRed표체홍색형광단백후,장해기인구건선성화병경현미주사도입반마어배태;통과형광현미경관찰화정체원위잡교기술대목적기인NSSA적표체진행정위,험증기간장특이성표체.채용RT-PCR방법화western blot방법대HCV NS5A기인적전록화번역수평진행검측;병검측간장병리상관적표지기인적전록수평변화.결과 세포전염실험증명기인구건pFC-5AiR적보고기인DsRed능구재간암세포Huh7중표체;반마어배태주사해기인구건후재간장능구관찰도홍색형광단백기인DsRed적표체;RT-PCR화western blot결과현시HCV기인NS5A능구재반마어체내정학표체;원위잡교결과진일보증명료NS5A적표체집중재반마어간장내.진일보RT-PCR검측표명HCV NS5A재반마어체내적표체가도치일사간대사화섬유화상관기인적상조,여Adiponectin、LDLR、Argsyn、TGF-β화HMGR등,추측NS5A재간장지방병변화섬유화중구유일정작용.결론 성공건립료반마어간장표체HCV NS5A적모형;초보수거표명HCV NS5A재반마어체내적표체여부분간대사화섬유화표지기인적이상표체상관;해모형가이용우HCV NS5A적체내병리궤제적연구.
