CAJ | 학술논문

目的观察促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)受体在培养的大鼠胃粘膜壁细胞中的定位,并探讨GnRH类似物阿拉瑞林(alarelin)对壁细胞内游离钙动员的机制.方法采用免疫组织化学和原位杂交技术;应用Ca2+指示剂Fluo-3-AM作为细胞内钙离子的荧光探针,对负载培养的胃壁细胞,应用激光共聚焦显微镜技术检测单个细胞内钙荧光强度的变化.结果大鼠胃壁细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,阳性物质位于细胞质,细胞核为阴性;同样壁细胞内可检测到GnRH受体mRNA杂交信号,阳性物质位于细胞质,细胞核为阴性;胞内Ca2+浓度变化为:1.在Hank液中,GnRH类似物浓度为10-8、10-7、10-6 mol/L时,胃壁细胞内Ca2+浓度逐渐升高,其峰高(峰值减去静息值)分别为7.1±1.4、12.1±1.7、16.8±2.2.其达峰时间也逐渐增快,分别为34.2±6.4s、18.9±1.2s、10.4±2.3s.相邻两组间其峰高及达峰时间均存在显著性差异(P＜0.05),且呈明显剂量依赖性.2.在D-Hank液(去除外钙)中,阿拉瑞林可轻度短暂升高胞内Ca2+;用内罗啶孵育后再加入阿拉瑞林也可轻度短暂升高胞内Ca2+,二者无显著性差异.3.当用拉西地平孵育后再加入阿拉瑞林,可明显抑制胞内Ca2+的增加.4.当用PLC(磷酸脂二酶)抑制剂和PKC(蛋白激酶C)抑制剂孵育后,再加阿拉瑞林,其胞内Ca2+升高仍受到抑制,明显小于单独应用10-6 mol/L的阿拉瑞林组(P＜0.01).结论大鼠胃壁细胞能自身表达GnRH受体;GnRH类似物可明显升高胃壁细胞内Ca2+浓度,且胞内Ca2+的增加主要源于外钙的内流,部分源于内钙的释放.其中细胞外钙的内流主要是通过L-型钙通道实现的.
목적관찰촉성선격소석방격소(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)수체재배양적대서위점막벽세포중적정위,병탐토GnRH유사물아랍서림(alarelin)대벽세포내유리개동원적궤제.방법채용면역조직화학화원위잡교기술;응용Ca2+지시제Fluo-3-AM작위세포내개리자적형광탐침,대부재배양적위벽세포,응용격광공취초현미경기술검측단개세포내개형광강도적변화.결과대서위벽세포정GnRH수체면역반응양성,양성물질위우세포질,세포핵위음성;동양벽세포내가검측도GnRH수체mRNA잡교신호,양성물질위우세포질,세포핵위음성;포내Ca2+농도변화위:1.재Hank액중,GnRH유사물농도위10-8、10-7、10-6 mol/L시,위벽세포내Ca2+농도축점승고,기봉고(봉치감거정식치)분별위7.1±1.4、12.1±1.7、16.8±2.2.기체봉시간야축점증쾌,분별위34.2±6.4s、18.9±1.2s、10.4±2.3s.상린량조간기봉고급체봉시간균존재현저성차이(P＜0.05),차정명현제량의뢰성.2.재D-Hank액(거제외개)중,아랍서림가경도단잠승고포내Ca2+;용내라정부육후재가입아랍서림야가경도단잠승고포내Ca2+,이자무현저성차이.3.당용랍서지평부육후재가입아랍서림,가명현억제포내Ca2+적증가.4.당용PLC(린산지이매)억제제화PKC(단백격매C)억제제부육후,재가아랍서림,기포내Ca2+승고잉수도억제,명현소우단독응용10-6 mol/L적아랍서림조(P＜0.01).결론대서위벽세포능자신표체GnRH수체;GnRH유사물가명현승고위벽세포내Ca2+농도,차포내Ca2+적증가주요원우외개적내류,부분원우내개적석방.기중세포외개적내류주요시통과L-형개통도실현적.