中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2006年
1期
29-32
,共4页
杨小昂%钱晓萍%孙秀媛%邵启祥%陈慰峰
楊小昂%錢曉萍%孫秀媛%邵啟祥%陳慰峰
양소앙%전효평%손수원%소계상%진위봉
蛋白表达和纯化%肿瘤相关抗原%HCA518%单克隆抗体
蛋白錶達和純化%腫瘤相關抗原%HCA518%單剋隆抗體
단백표체화순화%종류상관항원%HCA518%단극륭항체
目的:对HCA518蛋白进行表达和纯化,并制备HCA518蛋白的单克隆抗体.方法:采用基因重组技术在原核系统表达HCA518蛋白,金属镍螯合的Ni-NAT亲和层析柱进行蛋白纯化;杂交瘤技术建立分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株;ELISA方法进行单克隆抗体细胞株的筛选;Western blot方法鉴定单克隆抗体的特异性;免疫荧光法对HCA518蛋白进行定位.结果:成功表达和纯化了HCA518重组蛋白,其纯度达98%.共筛选出2株分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化了HCA518的单克隆抗体,腹水中单克隆抗体的效价分别为1×10-4、5×10-4,属于IgG2b亚型和IgM,该抗体能与重组蛋白和肿瘤细胞核蛋白(P100)发生特异性反应,免疫荧光显示HCA518蛋白主要定位于细胞核中.结论:建立了稳定分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体特异性好,对进一步应用于检测肿瘤组织中HCA518蛋白和判断肿瘤细胞的恶性增生程度预测肿瘤预后具有重要的实用价值.
目的:對HCA518蛋白進行錶達和純化,併製備HCA518蛋白的單剋隆抗體.方法:採用基因重組技術在原覈繫統錶達HCA518蛋白,金屬鎳螯閤的Ni-NAT親和層析柱進行蛋白純化;雜交瘤技術建立分泌HCA518單剋隆抗體的雜交瘤細胞株;ELISA方法進行單剋隆抗體細胞株的篩選;Western blot方法鑒定單剋隆抗體的特異性;免疫熒光法對HCA518蛋白進行定位.結果:成功錶達和純化瞭HCA518重組蛋白,其純度達98%.共篩選齣2株分泌HCA518單剋隆抗體的雜交瘤細胞株,製備腹水併純化瞭HCA518的單剋隆抗體,腹水中單剋隆抗體的效價分彆為1×10-4、5×10-4,屬于IgG2b亞型和IgM,該抗體能與重組蛋白和腫瘤細胞覈蛋白(P100)髮生特異性反應,免疫熒光顯示HCA518蛋白主要定位于細胞覈中.結論:建立瞭穩定分泌HCA518單剋隆抗體的雜交瘤細胞株,製備的單剋隆抗體特異性好,對進一步應用于檢測腫瘤組織中HCA518蛋白和判斷腫瘤細胞的噁性增生程度預測腫瘤預後具有重要的實用價值.
목적:대HCA518단백진행표체화순화,병제비HCA518단백적단극륭항체.방법:채용기인중조기술재원핵계통표체HCA518단백,금속얼오합적Ni-NAT친화층석주진행단백순화;잡교류기술건립분비HCA518단극륭항체적잡교류세포주;ELISA방법진행단극륭항체세포주적사선;Western blot방법감정단극륭항체적특이성;면역형광법대HCA518단백진행정위.결과:성공표체화순화료HCA518중조단백,기순도체98%.공사선출2주분비HCA518단극륭항체적잡교류세포주,제비복수병순화료HCA518적단극륭항체,복수중단극륭항체적효개분별위1×10-4、5×10-4,속우IgG2b아형화IgM,해항체능여중조단백화종류세포핵단백(P100)발생특이성반응,면역형광현시HCA518단백주요정위우세포핵중.결론:건립료은정분비HCA518단극륭항체적잡교류세포주,제비적단극륭항체특이성호,대진일보응용우검측종류조직중HCA518단백화판단종류세포적악성증생정도예측종류예후구유중요적실용개치.
