CAJ | 학술논문

为探索八氯腺苷的抗肿瘤作用机制,以神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-SH细胞为对象,采用四唑盐比色实验(MTT法)证明,八氯腺苷具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,这种抑制作用呈剂量-时间依赖性.流式细胞分析显示,10 μmol/L八氯腺苷作用48 h后可导致靶细胞生长停滞于G2/M期;SH-SY5Y细胞发生明显细胞凋亡,但SK-N-SH细胞却未见凋亡.Hoechst 33342染色显示,SK-N-SH细胞发生了核分裂异常.蛋白质免疫印迹分析证明,10μmol/L八氯腺苷处理SH-SY5Y 48～72 h后,G2检验点调节蛋白ATM、Chk1、Cdc25C和Cdc2磷酸化形式明显上调,同时伴有caspase-3的激活,提示SH-SY5Y细胞发生了G3检验点通路和细胞凋亡途径的激活.与SH-SY5Y细胞不同,在SK-N-SH细胞中,八氯腺苷处理24～96 h时,磷酸化ATM、磷酸化Chk1/Chk2、磷酸化Cdc25C以及磷酸化Cdc2的水平呈现逐渐降低的趋势.结果提示,SK-N-SH细胞在八氯腺苷处理后发生了G2检验点失败.蛋白质免疫印迹分析还显示,八氯腺苷可诱导p53在SH-SY5Y细胞的表达,但却不能影响SK-N-SH细胞的p53组成性表达水平.p21在SK-N-SH的组成性表达随八氯腺苷处理时间延长而逐渐减少,但在处理前后的SH-SY5Y细胞均未检测到p21蛋白的表达.上述实验结果提示,八氯腺苷抑制两种细胞增殖的机制不同:在SH-SY5Y细胞,八氯腺苷可激活ATM-Chk-Cdc25C-Cdc2/cyclin途径和凋亡通路,使细胞发生G2/M期阻滞和细胞凋亡;在SK-N-SH细胞,八氯腺苷诱导G2检验点失败,导致细胞阻滞在有丝分裂期,并发生有丝分裂异常.2种不同的细胞命运可能还与p53和p21表达不同有关.
위탐색팔록선감적항종류작용궤제,이신경모세포류SH-SY5Y화SK-N-SH세포위대상,채용사서염비색실험(MTT법)증명,팔록선감구유명현적억제종류세포증식적작용,저충억제작용정제량-시간의뢰성.류식세포분석현시,10 μmol/L팔록선감작용48 h후가도치파세포생장정체우G2/M기;SH-SY5Y세포발생명현세포조망,단SK-N-SH세포각미견조망.Hoechst 33342염색현시,SK-N-SH세포발생료핵분렬이상.단백질면역인적분석증명,10μmol/L팔록선감처리SH-SY5Y 48～72 h후,G2검험점조절단백ATM、Chk1、Cdc25C화Cdc2린산화형식명현상조,동시반유caspase-3적격활,제시SH-SY5Y세포발생료G3검험점통로화세포조망도경적격활.여SH-SY5Y세포불동,재SK-N-SH세포중,팔록선감처리24～96 h시,린산화ATM、린산화Chk1/Chk2、린산화Cdc25C이급린산화Cdc2적수평정현축점강저적추세.결과제시,SK-N-SH세포재팔록선감처리후발생료G2검험점실패.단백질면역인적분석환현시,팔록선감가유도p53재SH-SY5Y세포적표체,단각불능영향SK-N-SH세포적p53조성성표체수평.p21재SK-N-SH적조성성표체수팔록선감처리시간연장이축점감소,단재처리전후적SH-SY5Y세포균미검측도p21단백적표체.상술실험결과제시,팔록선감억제량충세포증식적궤제불동:재SH-SY5Y세포,팔록선감가격활ATM-Chk-Cdc25C-Cdc2/cyclin도경화조망통로,사세포발생G2/M기조체화세포조망;재SK-N-SH세포,팔록선감유도G2검험점실패,도치세포조체재유사분렬기,병발생유사분렬이상.2충불동적세포명운가능환여p53화p21표체불동유관.