生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2009年
10期
1313-1318
,共6页
冯衍生%刘梅冬%刘瑛%刘俊文%陈广文%张华莉%肖献忠
馮衍生%劉梅鼕%劉瑛%劉俊文%陳廣文%張華莉%肖獻忠
풍연생%류매동%류영%류준문%진엄문%장화리%초헌충
Kruppel样因子4(KLF4)%内毒素(LPS)%自介素6(IL-6)%炎症
Kruppel樣因子4(KLF4)%內毒素(LPS)%自介素6(IL-6)%炎癥
Kruppel양인자4(KLF4)%내독소(LPS)%자개소6(IL-6)%염증
探讨Kruppel样因子4(KLF4)对内毒素所致白介素(IL-6)的基因表达以及释放的影响,并对其调控机制做了初步研究.使用RT-PCR和Western blot检测KLF4 mRNA和蛋白质的表达.采用KLF4过表达的RAW264.7巨噬细胞株或反义寡核苷酸技术抑制内源性KLF4的表达,用RT-PCR和ELISA检测内毒素(LPS)刺激后IL-6 mRNA和蛋白质的表达.采用荧光素酶报告基因检测RAW264.7细胞中KLF4过表达对IL-6基因启动子报告基因转录活性的影响.使用EMSA法检测细胞中KLF4与IL-6基因启动子区KLF4元件的结合.结果表明:LPS可以诱导RAW264.7巨噬细胞KLF4的表达以及IL-6蛋白表达.KLF4过表达明显抑制IL-6的mRNA和蛋白质的表达,而KLF4缺失使这种作用消失.荧光素酶报告基因的结果显示,KLF4可以抑制LPS所致的IL-6基因启动子的转录活性.EMSA显示KLF4不能与IL-6启动子区的KLF4结合元件直接结合.结果表明,LPS可以促进RAW264.7小鼠巨噬细胞KLF4的表达和IL-6的释放.KLF4能抑制LPS诱导的IL-6表达和释放,其机制是抑制IL-6启动子的转录活性,但KLF4的抑制作用不是通过直接与IL-6基因的启动子区相结合而实现的.
探討Kruppel樣因子4(KLF4)對內毒素所緻白介素(IL-6)的基因錶達以及釋放的影響,併對其調控機製做瞭初步研究.使用RT-PCR和Western blot檢測KLF4 mRNA和蛋白質的錶達.採用KLF4過錶達的RAW264.7巨噬細胞株或反義寡覈苷痠技術抑製內源性KLF4的錶達,用RT-PCR和ELISA檢測內毒素(LPS)刺激後IL-6 mRNA和蛋白質的錶達.採用熒光素酶報告基因檢測RAW264.7細胞中KLF4過錶達對IL-6基因啟動子報告基因轉錄活性的影響.使用EMSA法檢測細胞中KLF4與IL-6基因啟動子區KLF4元件的結閤.結果錶明:LPS可以誘導RAW264.7巨噬細胞KLF4的錶達以及IL-6蛋白錶達.KLF4過錶達明顯抑製IL-6的mRNA和蛋白質的錶達,而KLF4缺失使這種作用消失.熒光素酶報告基因的結果顯示,KLF4可以抑製LPS所緻的IL-6基因啟動子的轉錄活性.EMSA顯示KLF4不能與IL-6啟動子區的KLF4結閤元件直接結閤.結果錶明,LPS可以促進RAW264.7小鼠巨噬細胞KLF4的錶達和IL-6的釋放.KLF4能抑製LPS誘導的IL-6錶達和釋放,其機製是抑製IL-6啟動子的轉錄活性,但KLF4的抑製作用不是通過直接與IL-6基因的啟動子區相結閤而實現的.
탐토Kruppel양인자4(KLF4)대내독소소치백개소(IL-6)적기인표체이급석방적영향,병대기조공궤제주료초보연구.사용RT-PCR화Western blot검측KLF4 mRNA화단백질적표체.채용KLF4과표체적RAW264.7거서세포주혹반의과핵감산기술억제내원성KLF4적표체,용RT-PCR화ELISA검측내독소(LPS)자격후IL-6 mRNA화단백질적표체.채용형광소매보고기인검측RAW264.7세포중KLF4과표체대IL-6기인계동자보고기인전록활성적영향.사용EMSA법검측세포중KLF4여IL-6기인계동자구KLF4원건적결합.결과표명:LPS가이유도RAW264.7거서세포KLF4적표체이급IL-6단백표체.KLF4과표체명현억제IL-6적mRNA화단백질적표체,이KLF4결실사저충작용소실.형광소매보고기인적결과현시,KLF4가이억제LPS소치적IL-6기인계동자적전록활성.EMSA현시KLF4불능여IL-6계동자구적KLF4결합원건직접결합.결과표명,LPS가이촉진RAW264.7소서거서세포KLF4적표체화IL-6적석방.KLF4능억제LPS유도적IL-6표체화석방,기궤제시억제IL-6계동자적전록활성,단KLF4적억제작용불시통과직접여IL-6기인적계동자구상결합이실현적.
