甘肃农业大学学报
甘肅農業大學學報
감숙농업대학학보
JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
5期
6-10
,共5页
王生富%孙晓林%段凤云%何延华%闫鸿斌%景志忠
王生富%孫曉林%段鳳雲%何延華%閆鴻斌%景誌忠
왕생부%손효림%단봉운%하연화%염홍빈%경지충
牦牛%IFN-β基因%巴斯德毕赤酵母%分泌表达
牦牛%IFN-β基因%巴斯德畢赤酵母%分泌錶達
모우%IFN-β기인%파사덕필적효모%분비표체
用真核表达引物从pGEM-yakIFN-β重组质粒中扩增出牦牛IFN-β基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重组表达质粒.通过电击法将经Sal Ⅰ线性化的pPIC9K-yakIFN-β质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,利用甲醇诱导表达,分泌表达产物用MTT法检测其生物学活性.经SDS-PAGE电泳分析表明:表达出约22 ku大小分泌于胞外的牦牛IFN-β蛋白分子量,比理论值稍大; MTT结果表明:纯化的重组yak-IFN-β蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性.
用真覈錶達引物從pGEM-yakIFN-β重組質粒中擴增齣牦牛IFN-β基因,將目的基因和真覈錶達載體pPIC9K連接轉入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重組錶達質粒.通過電擊法將經Sal Ⅰ線性化的pPIC9K-yakIFN-β質粒轉化到巴斯德畢赤酵母GS115感受態細胞中,採用G418抗性梯度法篩選得到多拷貝重組菌株,利用甲醇誘導錶達,分泌錶達產物用MTT法檢測其生物學活性.經SDS-PAGE電泳分析錶明:錶達齣約22 ku大小分泌于胞外的牦牛IFN-β蛋白分子量,比理論值稍大; MTT結果錶明:純化的重組yak-IFN-β蛋白具有促進淋巴細胞增殖的活性.
용진핵표체인물종pGEM-yakIFN-β중조질립중확증출모우IFN-β기인,장목적기인화진핵표체재체pPIC9K련접전입E.coli적JM109중,득도pPIC9K-yakIFN-β중조표체질립.통과전격법장경Sal Ⅰ선성화적pPIC9K-yakIFN-β질립전화도파사덕필적효모GS115감수태세포중,채용G418항성제도법사선득도다고패중조균주,이용갑순유도표체,분비표체산물용MTT법검측기생물학활성.경SDS-PAGE전영분석표명:표체출약22 ku대소분비우포외적모우IFN-β단백분자량,비이론치초대; MTT결과표명:순화적중조yak-IFN-β단백구유촉진림파세포증식적활성.
