大连工业大学学报
大連工業大學學報
대련공업대학학보
JOURNAL OF DALIAN POLYTECHNIC UNIVERSITY
2011年
1期
18-22
,共5页
张秀云%吴斌%肇慧君%贾赟%刘霞%张瑞
張秀雲%吳斌%肇慧君%賈赟%劉霞%張瑞
장수운%오빈%조혜군%가빈%류하%장서
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)%核衣壳蛋白基因(ORF7)%基因克隆%原核表达
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)%覈衣殼蛋白基因(ORF7)%基因剋隆%原覈錶達
저번식여호흡종합정병독(PRRSV)%핵의각단백기인(ORF7)%기인극륭%원핵표체
根据猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)VR2332株ORF7的全长基因序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR扩增出完整的ORF7基因,并将PCR产物克隆至pMD-18T载体进行测序分析.双酶切测序后重组质粒pMD-18T-N得到目的片段连接至原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-N.再转化至BL21宿主菌,对诱导表达条件(IPTG质量浓度、诱导时间、诱导温度)进行优化.结果显示,在37 ℃、0.2 mmol/L IPTG诱导5 h可实现重组N蛋白的高效表达.该重组N蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,Western-blotting分析显示,重组的N蛋白与PRRSV阳性血清发生特异性反应,表明表达的重组N蛋白具有较好的反应活性.
根據豬繁殖與呼吸綜閤癥病毒(PRRSV)VR2332株ORF7的全長基因序列設計一對特異性引物,應用RT-PCR擴增齣完整的ORF7基因,併將PCR產物剋隆至pMD-18T載體進行測序分析.雙酶切測序後重組質粒pMD-18T-N得到目的片段連接至原覈錶達載體pET-28a(+)上,構建重組質粒pET-28a(+)-N.再轉化至BL21宿主菌,對誘導錶達條件(IPTG質量濃度、誘導時間、誘導溫度)進行優化.結果顯示,在37 ℃、0.2 mmol/L IPTG誘導5 h可實現重組N蛋白的高效錶達.該重組N蛋白經Ni-NTA親和層析柱純化後,Western-blotting分析顯示,重組的N蛋白與PRRSV暘性血清髮生特異性反應,錶明錶達的重組N蛋白具有較好的反應活性.
근거저번식여호흡종합증병독(PRRSV)VR2332주ORF7적전장기인서렬설계일대특이성인물,응용RT-PCR확증출완정적ORF7기인,병장PCR산물극륭지pMD-18T재체진행측서분석.쌍매절측서후중조질립pMD-18T-N득도목적편단련접지원핵표체재체pET-28a(+)상,구건중조질립pET-28a(+)-N.재전화지BL21숙주균,대유도표체조건(IPTG질량농도、유도시간、유도온도)진행우화.결과현시,재37 ℃、0.2 mmol/L IPTG유도5 h가실현중조N단백적고효표체.해중조N단백경Ni-NTA친화층석주순화후,Western-blotting분석현시,중조적N단백여PRRSV양성혈청발생특이성반응,표명표체적중조N단백구유교호적반응활성.
