南京师大学报（自然科学版）
南京師大學報（自然科學版）
남경사대학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
3期
74-80
,共7页
李东霞%杨振%潘少坤%周楠楠%宋菲%曹祥荣
李東霞%楊振%潘少坤%週楠楠%宋菲%曹祥榮
리동하%양진%반소곤%주남남%송비%조상영
CD20%minibody%原核表达%大肠杆菌
CD20%minibody%原覈錶達%大腸桿菌
CD20%minibody%원핵표체%대장간균
目的:改造Rituximab,构建包含VL、VH和CH3的抗CD20微抗体minibody,并探索诱导其可溶性表达的最佳方法.方法:首先通过overlap PCR将Rituximab的VL和VH通过Linker连接在一起,成为单链抗体ScFv,再将ScFv和人源IgG1 CH3通过人源IgG1铰链区连成minibody的cDNA.将其克隆至表达载体pET28a(+)中,并在大肠杆菌中用IPTG诱导表达.结果:SDS-PAGE和Western blot结果表明,抗CD20的微抗体基因表达产物分子量约41.88 kDa,在20℃、1.0 mmol/L IPTG诱导24 h时minibody的可溶性表达量最大,同时还有包涵体形式的蛋白.可溶性抗体蛋白通过镍柱纯化,纯度达到90.25％,包涵体经过变、复性获得了高纯度的抗体蛋白.重组蛋白minibody可特异性地被兔抗人IgGl单克隆抗体识别,并且可特异性结合靶抗原CD20.结论:抗CD20微抗体minibody基因在此原核表达系统中成功表达,为其生物学功能和更好地针对B淋巴系统恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础.
目的:改造Rituximab,構建包含VL、VH和CH3的抗CD20微抗體minibody,併探索誘導其可溶性錶達的最佳方法.方法:首先通過overlap PCR將Rituximab的VL和VH通過Linker連接在一起,成為單鏈抗體ScFv,再將ScFv和人源IgG1 CH3通過人源IgG1鉸鏈區連成minibody的cDNA.將其剋隆至錶達載體pET28a(+)中,併在大腸桿菌中用IPTG誘導錶達.結果:SDS-PAGE和Western blot結果錶明,抗CD20的微抗體基因錶達產物分子量約41.88 kDa,在20℃、1.0 mmol/L IPTG誘導24 h時minibody的可溶性錶達量最大,同時還有包涵體形式的蛋白.可溶性抗體蛋白通過鎳柱純化,純度達到90.25％,包涵體經過變、複性穫得瞭高純度的抗體蛋白.重組蛋白minibody可特異性地被兔抗人IgGl單剋隆抗體識彆,併且可特異性結閤靶抗原CD20.結論:抗CD20微抗體minibody基因在此原覈錶達繫統中成功錶達,為其生物學功能和更好地針對B淋巴繫統噁性腫瘤的靶嚮治療奠定瞭基礎.
목적:개조Rituximab,구건포함VL、VH화CH3적항CD20미항체minibody,병탐색유도기가용성표체적최가방법.방법:수선통과overlap PCR장Rituximab적VL화VH통과Linker련접재일기,성위단련항체ScFv,재장ScFv화인원IgG1 CH3통과인원IgG1교련구련성minibody적cDNA.장기극륭지표체재체pET28a(+)중,병재대장간균중용IPTG유도표체.결과:SDS-PAGE화Western blot결과표명,항CD20적미항체기인표체산물분자량약41.88 kDa,재20℃、1.0 mmol/L IPTG유도24 h시minibody적가용성표체량최대,동시환유포함체형식적단백.가용성항체단백통과얼주순화,순도체도90.25％,포함체경과변、복성획득료고순도적항체단백.중조단백minibody가특이성지피토항인IgGl단극륭항체식별,병차가특이성결합파항원CD20.결론:항CD20미항체minibody기인재차원핵표체계통중성공표체,위기생물학공능화경호지침대B림파계통악성종류적파향치료전정료기출.
