中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
2001年
1期
52-58
,共7页
红细胞%分化相关因子%原核表达
紅細胞%分化相關因子%原覈錶達
홍세포%분화상관인자%원핵표체
以质粒pBS-SK-MEDDF上的小鼠 MEDDF cDNA片段为模板, 通过PCR方法删除该片段的非编码序列, 将编码序列克隆到pGEM-T-Easy质粒中, 经DNA序列测定后, 证明其克隆序列正确, 再将MEDDF编码序列定向克隆到表达载体pET-30α(+)的BamHⅠ和HindⅢ位点之间, 构建了原核表达载体, 在获高效表达菌株中, 特异表达蛋白质的量占细菌总蛋白的40%. 以纯化的该蛋白质为抗原, 免疫新西兰纯种大耳兔, 获得高效价的抗血清. 经免疫细胞化学验证, MEDDF在红细胞的表达具有发育阶段特异性, 推测与小鼠红细胞终末分化的启动及细胞核浓缩相关. 另外, MEDDF还在小鼠骨髓中的粒细胞系及巨核细胞系表达, 说明该蛋白质与小鼠骨髓髓系细胞的分化有渊源关系.
以質粒pBS-SK-MEDDF上的小鼠 MEDDF cDNA片段為模闆, 通過PCR方法刪除該片段的非編碼序列, 將編碼序列剋隆到pGEM-T-Easy質粒中, 經DNA序列測定後, 證明其剋隆序列正確, 再將MEDDF編碼序列定嚮剋隆到錶達載體pET-30α(+)的BamHⅠ和HindⅢ位點之間, 構建瞭原覈錶達載體, 在穫高效錶達菌株中, 特異錶達蛋白質的量佔細菌總蛋白的40%. 以純化的該蛋白質為抗原, 免疫新西蘭純種大耳兔, 穫得高效價的抗血清. 經免疫細胞化學驗證, MEDDF在紅細胞的錶達具有髮育階段特異性, 推測與小鼠紅細胞終末分化的啟動及細胞覈濃縮相關. 另外, MEDDF還在小鼠骨髓中的粒細胞繫及巨覈細胞繫錶達, 說明該蛋白質與小鼠骨髓髓繫細胞的分化有淵源關繫.
이질립pBS-SK-MEDDF상적소서 MEDDF cDNA편단위모판, 통과PCR방법산제해편단적비편마서렬, 장편마서렬극륭도pGEM-T-Easy질립중, 경DNA서렬측정후, 증명기극륭서렬정학, 재장MEDDF편마서렬정향극륭도표체재체pET-30α(+)적BamHⅠ화HindⅢ위점지간, 구건료원핵표체재체, 재획고효표체균주중, 특이표체단백질적량점세균총단백적40%. 이순화적해단백질위항원, 면역신서란순충대이토, 획득고효개적항혈청. 경면역세포화학험증, MEDDF재홍세포적표체구유발육계단특이성, 추측여소서홍세포종말분화적계동급세포핵농축상관. 령외, MEDDF환재소서골수중적립세포계급거핵세포계표체, 설명해단백질여소서골수수계세포적분화유연원관계.
