中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2002年
2期
179-184
,共6页
张颖%徐冲%杨永辉%宫红%朱国萍%滕脉坤%牛立文
張穎%徐遲%楊永輝%宮紅%硃國萍%滕脈坤%牛立文
장영%서충%양영휘%궁홍%주국평%등맥곤%우립문
葡萄糖异构酶%链霉菌%同源重组%克隆受体
葡萄糖異構酶%鏈黴菌%同源重組%剋隆受體
포도당이구매%련매균%동원중조%극륭수체
为了发展优良的链霉菌宿主系统,以带有硫链丝菌素抗性的同源重组葡萄糖异构酶(GI)缺陷型菌株M1033XW78,M1033XW194为出发菌株,利用摇瓶、影印和负筛的方法,获得一株既无GI活性又对硫链丝菌素敏感的回复菌株,命名为淀粉酶链霉菌M53.通过染色体PCR检测、酶切图谱鉴定、序列分析等方法,确认M53含有和M1033一致的1.2kb葡萄糖异构酶基因,但在结构基因345～1095 bp片段内有17个碱基发生突变.这说明在染色体内自发同源重组过程中,有低频率的突变位点引入.酶活力测定和SDS-PAGE分析表明,该突变的GI基因不表达42.5 KD葡萄糖异构酶,这为M53菌株发展成为优良的链霉菌宿主提供了足够的表达空间.一系列的转化实验也证明了M53菌株很可能是一种新型链霉菌克隆受体.
為瞭髮展優良的鏈黴菌宿主繫統,以帶有硫鏈絲菌素抗性的同源重組葡萄糖異構酶(GI)缺陷型菌株M1033XW78,M1033XW194為齣髮菌株,利用搖瓶、影印和負篩的方法,穫得一株既無GI活性又對硫鏈絲菌素敏感的迴複菌株,命名為澱粉酶鏈黴菌M53.通過染色體PCR檢測、酶切圖譜鑒定、序列分析等方法,確認M53含有和M1033一緻的1.2kb葡萄糖異構酶基因,但在結構基因345～1095 bp片段內有17箇堿基髮生突變.這說明在染色體內自髮同源重組過程中,有低頻率的突變位點引入.酶活力測定和SDS-PAGE分析錶明,該突變的GI基因不錶達42.5 KD葡萄糖異構酶,這為M53菌株髮展成為優良的鏈黴菌宿主提供瞭足夠的錶達空間.一繫列的轉化實驗也證明瞭M53菌株很可能是一種新型鏈黴菌剋隆受體.
위료발전우량적련매균숙주계통,이대유류련사균소항성적동원중조포도당이구매(GI)결함형균주M1033XW78,M1033XW194위출발균주,이용요병、영인화부사적방법,획득일주기무GI활성우대류련사균소민감적회복균주,명명위정분매련매균M53.통과염색체PCR검측、매절도보감정、서렬분석등방법,학인M53함유화M1033일치적1.2kb포도당이구매기인,단재결구기인345～1095 bp편단내유17개감기발생돌변.저설명재염색체내자발동원중조과정중,유저빈솔적돌변위점인입.매활력측정화SDS-PAGE분석표명,해돌변적GI기인불표체42.5 KD포도당이구매,저위M53균주발전성위우량적련매균숙주제공료족구적표체공간.일계렬적전화실험야증명료M53균주흔가능시일충신형련매균극륭수체.
