中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2005年
4期
529-536
,共8页
毛建平%王全会%施水兰%袁国刚%左刚%崔玉芳%毛秉智
毛建平%王全會%施水蘭%袁國剛%左剛%崔玉芳%毛秉智
모건평%왕전회%시수란%원국강%좌강%최옥방%모병지
mRNA%反义寡核苷酸%靶点%PARASS%GFP
mRNA%反義寡覈苷痠%靶點%PARASS%GFP
mRNA%반의과핵감산%파점%PARASS%GFP
基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(poly-A anchored RNAaccessible sites screening)方法,即通过在mRNA末端引入poly A,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3'末端得到固定,保持mRNA的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mRNA的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GFP)mRNA的3个反义寡核苷酸结合靶点,据其设计了多条反义寡核苷酸,与对照组相比,体外RNase H分析显示3个靶点均为有效,在HeLa细胞内针对靶点的反义寡核苷酸能抑制GFP的表达,得到了Northern印迹结果支持.PARASS对反义寡核苷酸药物设计具有应用价值.
基因mRNA的靶點篩選是設計反義寡覈苷痠的關鍵.建立瞭PARASS(poly-A anchored RNAaccessible sites screening)方法,即通過在mRNA末耑引入poly A,與生物素標記的polyT退火結閤,將其同鏈親和素磁珠混閤,使mRNA通過3'末耑得到固定,保持mRNA的自然伸展和摺疊,與寡覈苷痠文庫雜交篩選mRNA的結閤靶點.PARASS篩選穫得瞭綠色熒光蛋白(GFP)mRNA的3箇反義寡覈苷痠結閤靶點,據其設計瞭多條反義寡覈苷痠,與對照組相比,體外RNase H分析顯示3箇靶點均為有效,在HeLa細胞內針對靶點的反義寡覈苷痠能抑製GFP的錶達,得到瞭Northern印跡結果支持.PARASS對反義寡覈苷痠藥物設計具有應用價值.
기인mRNA적파점사선시설계반의과핵감산적관건.건립료PARASS(poly-A anchored RNAaccessible sites screening)방법,즉통과재mRNA말단인입poly A,여생물소표기적polyT퇴화결합,장기동련친화소자주혼합,사mRNA통과3'말단득도고정,보지mRNA적자연신전화절첩,여과핵감산문고잡교사선mRNA적결합파점.PARASS사선획득료록색형광단백(GFP)mRNA적3개반의과핵감산결합파점,거기설계료다조반의과핵감산,여대조조상비,체외RNase H분석현시3개파점균위유효,재HeLa세포내침대파점적반의과핵감산능억제GFP적표체,득도료Northern인적결과지지.PARASS대반의과핵감산약물설계구유응용개치.
