中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2005年
12期
2392-2395
,共4页
内皮生长因子%肾肿瘤%基因表达
內皮生長因子%腎腫瘤%基因錶達
내피생장인자%신종류%기인표체
目的:构建反义VEGF基因真核表达载体,研究其对肾癌细胞VEGF表达的影响.方法:克隆人VEGF基因,将反义VEGF基因定向克隆于质粒pcDNA3.1(-)真核表达载体,酶切鉴定;转染人肾癌细胞,G418筛选阳性克隆.RT-PCR方法检测VEGFmRNA的表达,免疫组化法检测VEGF基因的蛋白表达,MTT法测细胞生长,流式细胞术检测细胞周期.结果:成功构建反义VEGF基因真核表达载体;反义VEGF组VEGFmRNA的表达受到抑制,明显低于空载体组和对照组VEGFmRNA的表达,空载体组VEGFmRNA的表达没有受到影响;反义VEGF组的VEGF蛋白表达明显低于空载体组和对照组,空载体组和对照组VEGF蛋白的表达无显著差异;反义VEGF组细胞生长减慢,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少.结论:人反义VEGF基因可明显降低肾癌细胞VEGF基因在转录和翻译水平的表达,抑制肾癌细胞生长,为肾癌基因治疗提供一定的实验依据.
目的:構建反義VEGF基因真覈錶達載體,研究其對腎癌細胞VEGF錶達的影響.方法:剋隆人VEGF基因,將反義VEGF基因定嚮剋隆于質粒pcDNA3.1(-)真覈錶達載體,酶切鑒定;轉染人腎癌細胞,G418篩選暘性剋隆.RT-PCR方法檢測VEGFmRNA的錶達,免疫組化法檢測VEGF基因的蛋白錶達,MTT法測細胞生長,流式細胞術檢測細胞週期.結果:成功構建反義VEGF基因真覈錶達載體;反義VEGF組VEGFmRNA的錶達受到抑製,明顯低于空載體組和對照組VEGFmRNA的錶達,空載體組VEGFmRNA的錶達沒有受到影響;反義VEGF組的VEGF蛋白錶達明顯低于空載體組和對照組,空載體組和對照組VEGF蛋白的錶達無顯著差異;反義VEGF組細胞生長減慢,G1期細胞比例增加,S期細胞比例減少.結論:人反義VEGF基因可明顯降低腎癌細胞VEGF基因在轉錄和翻譯水平的錶達,抑製腎癌細胞生長,為腎癌基因治療提供一定的實驗依據.
목적:구건반의VEGF기인진핵표체재체,연구기대신암세포VEGF표체적영향.방법:극륭인VEGF기인,장반의VEGF기인정향극륭우질립pcDNA3.1(-)진핵표체재체,매절감정;전염인신암세포,G418사선양성극륭.RT-PCR방법검측VEGFmRNA적표체,면역조화법검측VEGF기인적단백표체,MTT법측세포생장,류식세포술검측세포주기.결과:성공구건반의VEGF기인진핵표체재체;반의VEGF조VEGFmRNA적표체수도억제,명현저우공재체조화대조조VEGFmRNA적표체,공재체조VEGFmRNA적표체몰유수도영향;반의VEGF조적VEGF단백표체명현저우공재체조화대조조,공재체조화대조조VEGF단백적표체무현저차이;반의VEGF조세포생장감만,G1기세포비례증가,S기세포비례감소.결론:인반의VEGF기인가명현강저신암세포VEGF기인재전록화번역수평적표체,억제신암세포생장,위신암기인치료제공일정적실험의거.
