郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2010年
1期
4-8
,共5页
魏攀%李杰%王莉莉%许培荣%薛乐勋
魏攀%李傑%王莉莉%許培榮%薛樂勛
위반%리걸%왕리리%허배영%설악훈
杜氏盐藻%14-3-3基因%食管鳞癌%Bcl-2%Caspase-9
杜氏鹽藻%14-3-3基因%食管鱗癌%Bcl-2%Caspase-9
두씨염조%14-3-3기인%식관린암%Bcl-2%Caspase-9
目的:探讨转染杜氏盐藻14-3-3基因对食管鳞癌EC9709细胞Bcl-2和Caspase-9蛋白表达的影响.方法:将杜氏盐藻14-3-3基因cDNA序列分别亚克隆入表达载体pEGFP-C1和pcDNA3.1(+)的Hind Ⅲ和Bam H Ⅰ位点,构建真核表达载体pEGFP-C1-14-3-3和pcDNA3.1(+)-14-3-3,采用脂质体方法转染EC9706细胞,同时设立空载体对照和空白对照,荧光显微镜观察pEGFP-14-3-3融合蛋白在EC9709细胞中的定位;G-418筛选稳定转染pcD-NA3.1(+)-14-3-3的细胞株,采用RT-PCR和Western blotting法检测14-3-3基因的表达;Western blotting检测3种细胞中Bcl-2和Caspase-9蛋白的表达.结果:pEGFP-14-3-3融合蛋白定位于EC9706细胞的细胞核;通过G-418筛选,最终获得稳定表达盐藻14-3-3基因的转染细胞株;与转染空载体和空白对照的EC9706细胞相比,转染pcDNA3.1(+)-14-3-3的EC9706细胞中Bcl-2蛋白表达量明显增高[(1.60±0.20)、(0.90±0.15)和(2.40±0.10);F=69.889 7,P＜0.001],而Caspase-9蛋白表达量明显降低[(1.00±0.04)、(1.40±0.08)和(0.40±0.05);F=217.066 7,P＜0.001].结论:杜氏盐藻14-3-3基因可能在EC9706细胞凋亡过程中发挥了抑制作用.
目的:探討轉染杜氏鹽藻14-3-3基因對食管鱗癌EC9709細胞Bcl-2和Caspase-9蛋白錶達的影響.方法:將杜氏鹽藻14-3-3基因cDNA序列分彆亞剋隆入錶達載體pEGFP-C1和pcDNA3.1(+)的Hind Ⅲ和Bam H Ⅰ位點,構建真覈錶達載體pEGFP-C1-14-3-3和pcDNA3.1(+)-14-3-3,採用脂質體方法轉染EC9706細胞,同時設立空載體對照和空白對照,熒光顯微鏡觀察pEGFP-14-3-3融閤蛋白在EC9709細胞中的定位;G-418篩選穩定轉染pcD-NA3.1(+)-14-3-3的細胞株,採用RT-PCR和Western blotting法檢測14-3-3基因的錶達;Western blotting檢測3種細胞中Bcl-2和Caspase-9蛋白的錶達.結果:pEGFP-14-3-3融閤蛋白定位于EC9706細胞的細胞覈;通過G-418篩選,最終穫得穩定錶達鹽藻14-3-3基因的轉染細胞株;與轉染空載體和空白對照的EC9706細胞相比,轉染pcDNA3.1(+)-14-3-3的EC9706細胞中Bcl-2蛋白錶達量明顯增高[(1.60±0.20)、(0.90±0.15)和(2.40±0.10);F=69.889 7,P＜0.001],而Caspase-9蛋白錶達量明顯降低[(1.00±0.04)、(1.40±0.08)和(0.40±0.05);F=217.066 7,P＜0.001].結論:杜氏鹽藻14-3-3基因可能在EC9706細胞凋亡過程中髮揮瞭抑製作用.
목적:탐토전염두씨염조14-3-3기인대식관린암EC9709세포Bcl-2화Caspase-9단백표체적영향.방법:장두씨염조14-3-3기인cDNA서렬분별아극륭입표체재체pEGFP-C1화pcDNA3.1(+)적Hind Ⅲ화Bam H Ⅰ위점,구건진핵표체재체pEGFP-C1-14-3-3화pcDNA3.1(+)-14-3-3,채용지질체방법전염EC9706세포,동시설립공재체대조화공백대조,형광현미경관찰pEGFP-14-3-3융합단백재EC9709세포중적정위;G-418사선은정전염pcD-NA3.1(+)-14-3-3적세포주,채용RT-PCR화Western blotting법검측14-3-3기인적표체;Western blotting검측3충세포중Bcl-2화Caspase-9단백적표체.결과:pEGFP-14-3-3융합단백정위우EC9706세포적세포핵;통과G-418사선,최종획득은정표체염조14-3-3기인적전염세포주;여전염공재체화공백대조적EC9706세포상비,전염pcDNA3.1(+)-14-3-3적EC9706세포중Bcl-2단백표체량명현증고[(1.60±0.20)、(0.90±0.15)화(2.40±0.10);F=69.889 7,P＜0.001],이Caspase-9단백표체량명현강저[(1.00±0.04)、(1.40±0.08)화(0.40±0.05);F=217.066 7,P＜0.001].결론:두씨염조14-3-3기인가능재EC9706세포조망과정중발휘료억제작용.
