热带生物学报
熱帶生物學報
열대생물학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA UNIVERSITY OF TROPICAL AGRICULTURE
2010年
4期
301-306,313
,共7页
邱丰艳%邓用川%林栖凤%刘国民
邱豐豔%鄧用川%林棲鳳%劉國民
구봉염%산용천%림서봉%류국민
胡萝卜%ISSR%优化
鬍蘿蔔%ISSR%優化
호라복%ISSR%우화
以改良CTAB法提取胡萝卜基因组DNA作为ISSR-PCR模板,通过单因素试验建立了一套适合胡萝卜ISSR-PCR的优化的反应体系,即25μL反应液中含10×buffer 2.5 μL,2.0 mmol·L-1Mg2+,200 μmol·L-1dNTPs,Taq酶1.5 U,引物0.5 μmol·L-1,DNA模板20 ng.PCR扩增程序为:94 ℃预变性4 min,94 ℃变性40 s,48-58 ℃退火45 s,72 ℃延伸2 min,进行35个循环,72 ℃延伸8 min,在16℃保存.应用该优化反应体系筛选出了24条有效引物.
以改良CTAB法提取鬍蘿蔔基因組DNA作為ISSR-PCR模闆,通過單因素試驗建立瞭一套適閤鬍蘿蔔ISSR-PCR的優化的反應體繫,即25μL反應液中含10×buffer 2.5 μL,2.0 mmol·L-1Mg2+,200 μmol·L-1dNTPs,Taq酶1.5 U,引物0.5 μmol·L-1,DNA模闆20 ng.PCR擴增程序為:94 ℃預變性4 min,94 ℃變性40 s,48-58 ℃退火45 s,72 ℃延伸2 min,進行35箇循環,72 ℃延伸8 min,在16℃保存.應用該優化反應體繫篩選齣瞭24條有效引物.
이개량CTAB법제취호라복기인조DNA작위ISSR-PCR모판,통과단인소시험건립료일투괄합호라복ISSR-PCR적우화적반응체계,즉25μL반응액중함10×buffer 2.5 μL,2.0 mmol·L-1Mg2+,200 μmol·L-1dNTPs,Taq매1.5 U,인물0.5 μmol·L-1,DNA모판20 ng.PCR확증정서위:94 ℃예변성4 min,94 ℃변성40 s,48-58 ℃퇴화45 s,72 ℃연신2 min,진행35개순배,72 ℃연신8 min,재16℃보존.응용해우화반응체계사선출료24조유효인물.
