CAJ | 학술논문

旨在优化并建立有利于山羊类ES细胞生长的饲养层细胞、培养基、细胞因子和传代方法.本研究选择武汉市本地白山羊配种6～7 d后的胚胎,通过全胚培养法、酶消化与机械分离结合法分离山羊类ES细胞,并在不同的细胞饲养层中饲养、在培养基中添加不同的生长因子、采用不同的传代方法,比较不同培养条件对山羊类ES细胞生长和增殖的影响.通过碱性磷酸酶染色和免疫组化染色法鉴定ES细胞特异生物标记AKT、SSEA-1和Oct-4的表达,并将得到的山羊类ES细胞进行体外分化.结果表明,与小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)和山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblast,GEF)相比,C2C12更有利于细胞的贴壁,但差异不显著(P＞0.05)；细胞传代时,在高浓度细胞因子LIF(Leukemia inhibitory factor)和SCF(Stem cell factor)中处理ICM(Inner cell mass),更有利于细胞传代(传至第8代)；培养基中添加LIF和SCF的同时,添加肝素和胰岛素,更有利于细胞的传代(传至第9代)；山羊类ES细胞中SSEA-1(Stage-specific embryonic antigens-1)和Oct-4免疫组化染色呈阳性,在体外培养时可以分化为上皮样细胞、空泡样细胞和跳动的类心肌细胞.成功分离得到能自然分化成不同类型细胞的山羊类ES细胞.
지재우화병건립유리우산양류ES세포생장적사양층세포、배양기、세포인자화전대방법.본연구선택무한시본지백산양배충6～7 d후적배태,통과전배배양법、매소화여궤계분리결합법분리산양류ES세포,병재불동적세포사양층중사양、재배양기중첨가불동적생장인자、채용불동적전대방법,비교불동배양조건대산양류ES세포생장화증식적영향.통과감성린산매염색화면역조화염색법감정ES세포특이생물표기AKT、SSEA-1화Oct-4적표체,병장득도적산양류ES세포진행체외분화.결과표명,여소서태인성섬유세포(Mouse embryonic fibroblast,MEF)화산양태인성섬유세포(Goat embryonic fibroblast,GEF)상비,C2C12경유리우세포적첩벽,단차이불현저(P＞0.05)；세포전대시,재고농도세포인자LIF(Leukemia inhibitory factor)화SCF(Stem cell factor)중처리ICM(Inner cell mass),경유리우세포전대(전지제8대)；배양기중첨가LIF화SCF적동시,첨가간소화이도소,경유리우세포적전대(전지제9대)；산양류ES세포중SSEA-1(Stage-specific embryonic antigens-1)화Oct-4면역조화염색정양성,재체외배양시가이분화위상피양세포、공포양세포화도동적류심기세포.성공분리득도능자연분화성불동류형세포적산양류ES세포.