中华老年口腔医学杂志
中華老年口腔醫學雜誌
중화노년구강의학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERIATRIC DENTISTRY
2012年
1期
5-9
,共5页
范红渠%周卫兵%郝鲁峰%邵磊%王智勇
範紅渠%週衛兵%郝魯峰%邵磊%王智勇
범홍거%주위병%학로봉%소뢰%왕지용
nm23-H1%重组腺病毒%构建%鉴定
nm23-H1%重組腺病毒%構建%鑒定
nm23-H1%중조선병독%구건%감정
目的:构建表达入nm23-H1基因的重组腺病毒载体,并在人胚肾293细胞中进行鉴定.方法:以重组质粒pcDNA3.1-nm23-H1中提取的nm23-H1基因为模板,采用PCR法扩增基因片段.将扩增的基因片段插入穿梭质粒pShuttle-CMV,并转化大肠肝菌DH5α.筛选重组质粒pShuttle-C MV-nm23-H1,电转化已转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-nm23-H1,用Lipofectamine转染293细胞,制备携带人全长nm23-H1基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-nm23-H1.大量扩增Ad-nm23-H1病毒颗粒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法检测nm23-H1基因在293细胞中的转录.结果:经PCR、酶切鉴定及DNA测序结果证实pShuttleCMV-nm23-H1及pAdEasy-nm23-H1质粒正确构建,纯化后的Ad-nm23-H1病毒颗粒感染性滴度为109.5(3.4×109)CCIDs/ml,经RT-PCR扩增出的基因片段,与目的片段大小一致.结论:已成功构建了表达nm23-H1重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了依据.
目的:構建錶達入nm23-H1基因的重組腺病毒載體,併在人胚腎293細胞中進行鑒定.方法:以重組質粒pcDNA3.1-nm23-H1中提取的nm23-H1基因為模闆,採用PCR法擴增基因片段.將擴增的基因片段插入穿梭質粒pShuttle-CMV,併轉化大腸肝菌DH5α.篩選重組質粒pShuttle-C MV-nm23-H1,電轉化已轉化瞭pAdEasy-1的BJ5183細胞.篩選重組腺病毒質粒pAdEasy-nm23-H1,用Lipofectamine轉染293細胞,製備攜帶人全長nm23-H1基因的重組複製缺陷型腺病毒Ad-nm23-H1.大量擴增Ad-nm23-H1病毒顆粒,併測定病毒滴度.採用RT-PCR法檢測nm23-H1基因在293細胞中的轉錄.結果:經PCR、酶切鑒定及DNA測序結果證實pShuttleCMV-nm23-H1及pAdEasy-nm23-H1質粒正確構建,純化後的Ad-nm23-H1病毒顆粒感染性滴度為109.5(3.4×109)CCIDs/ml,經RT-PCR擴增齣的基因片段,與目的片段大小一緻.結論:已成功構建瞭錶達nm23-H1重組腺病毒載體,為腫瘤的基因治療提供瞭依據.
목적:구건표체입nm23-H1기인적중조선병독재체,병재인배신293세포중진행감정.방법:이중조질립pcDNA3.1-nm23-H1중제취적nm23-H1기인위모판,채용PCR법확증기인편단.장확증적기인편단삽입천사질립pShuttle-CMV,병전화대장간균DH5α.사선중조질립pShuttle-C MV-nm23-H1,전전화이전화료pAdEasy-1적BJ5183세포.사선중조선병독질립pAdEasy-nm23-H1,용Lipofectamine전염293세포,제비휴대인전장nm23-H1기인적중조복제결함형선병독Ad-nm23-H1.대량확증Ad-nm23-H1병독과립,병측정병독적도.채용RT-PCR법검측nm23-H1기인재293세포중적전록.결과:경PCR、매절감정급DNA측서결과증실pShuttleCMV-nm23-H1급pAdEasy-nm23-H1질립정학구건,순화후적Ad-nm23-H1병독과립감염성적도위109.5(3.4×109)CCIDs/ml,경RT-PCR확증출적기인편단,여목적편단대소일치.결론:이성공구건료표체nm23-H1중조선병독재체,위종류적기인치료제공료의거.
