CAJ | 학술논문

pTet-on-Advanced双载体表达系统应用于转基因动物研制,需要建立两种动物品系,经过杂交和筛选,才有可能得到转基因个体,操作繁琐,转化效率低.本研究在改良的四环素(Tet-on)基因可调控系统基础上,通过PCR的方法,分别从pTet-on-Advanced质粒和pEGFP-N1质粒中扩增rtTA和EGFP基因,测序正确后,将rtTA和EGFP基因亚克隆入pTRE-Tight载体中,构建四环素pTRE-Tight-rtTA -EGFP单载体表达系统,然后采用脂质体法,将新构建的单载体表达体系pTRE-Tight-rtTA -EGFP转染猪胎儿成纤维细胞,以不同浓度(0.0001、0.001、0.01、0.1和1g/L)强力霉素(Dox)诱导,通过荧光显微镜检测EGFP 的表达量.结果显示,转染48 h后,未加Dox无绿色荧光表达；1g/L Dos诱导可以观察到绿色荧光；Dox浓度分别为0.0001、0.001、0.01和0.1 g/L未观察到绿色荧光.表明l g/L Dox才能激发调控作用.本研究成功构建pTRE-Tight-rt TA-EGFP新型可控性真核表达载体,该载体在细胞中的表达受Dox的调控,能正常发挥作用.研究结果为转基因的定量表达提供了新的技术平台,也为将构建的单载体用于表达可控的转基因动物研究提供了重要科学依据.
pTet-on-Advanced쌍재체표체계통응용우전기인동물연제,수요건립량충동물품계,경과잡교화사선,재유가능득도전기인개체,조작번쇄,전화효솔저.본연구재개량적사배소(Tet-on)기인가조공계통기출상,통과PCR적방법,분별종pTet-on-Advanced질립화pEGFP-N1질립중확증rtTA화EGFP기인,측서정학후,장rtTA화EGFP기인아극륭입pTRE-Tight재체중,구건사배소pTRE-Tight-rtTA -EGFP단재체표체계통,연후채용지질체법,장신구건적단재체표체체계pTRE-Tight-rtTA -EGFP전염저태인성섬유세포,이불동농도(0.0001、0.001、0.01、0.1화1g/L)강력매소(Dox)유도,통과형광현미경검측EGFP 적표체량.결과현시,전염48 h후,미가Dox무록색형광표체；1g/L Dos유도가이관찰도록색형광；Dox농도분별위0.0001、0.001、0.01화0.1 g/L미관찰도록색형광.표명l g/L Dox재능격발조공작용.본연구성공구건pTRE-Tight-rt TA-EGFP신형가공성진핵표체재체,해재체재세포중적표체수Dox적조공,능정상발휘작용.연구결과위전기인적정량표체제공료신적기술평태,야위장구건적단재체용우표체가공적전기인동물연구제공료중요과학의거.