国际肿瘤学杂志
國際腫瘤學雜誌
국제종류학잡지
JOURNAL OF INTERNATIONAL ONCOLOGY
2006年
6期
466-469
,共4页
孟薇%王一飞%胡红梅%熊盛%钱垂文%张美英
孟薇%王一飛%鬍紅梅%熊盛%錢垂文%張美英
맹미%왕일비%호홍매%웅성%전수문%장미영
基因,nm23-H1%腺病毒,人%基因,肿瘤抑制
基因,nm23-H1%腺病毒,人%基因,腫瘤抑製
기인,nm23-H1%선병독,인%기인,종류억제
目的构建人肿瘤转移抑制基因nm23-H1的重组腺病毒载体.方法通过PCR方法以pcDNA3.1-nm23-H1为模板扩增出编码152个氨基酸的nm23-H1基因,并连接入穿梭质粒pShuttle-CMV.将含有目的基因的重组穿梭质粒pShuttleCMV-nm23-H1经Pme Ⅰ线性化后转化入AdEasier-1感受态细胞,用含硫酸卡那霉素的LB培养基筛选重组子,并用PCR及酶切方法鉴定.鉴定正确的pAd-nm23-H1质粒经Pac Ⅰ线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Adeno-nm23-H1,并进行PCR鉴定及病毒滴度测定.结果PCR、酶切鉴定及测序结果证实pShuttleCMV-nm23-H1及pAd-nm23-H1质粒正确构建,收获病毒后的PCR鉴定及DNA测序结果证明Adeno-nm23-H1包被成功且无野生型腺病毒产生.重组腺病毒Adeno-nm23-H1滴度为4.3×109/ml.结论成功构建了重组腺病毒载体Adeno-nm23-H1,为进一步研究nm23-H1抑制肿瘤转移分子机制及基因治疗奠定了基础.
目的構建人腫瘤轉移抑製基因nm23-H1的重組腺病毒載體.方法通過PCR方法以pcDNA3.1-nm23-H1為模闆擴增齣編碼152箇氨基痠的nm23-H1基因,併連接入穿梭質粒pShuttle-CMV.將含有目的基因的重組穿梭質粒pShuttleCMV-nm23-H1經Pme Ⅰ線性化後轉化入AdEasier-1感受態細胞,用含硫痠卡那黴素的LB培養基篩選重組子,併用PCR及酶切方法鑒定.鑒定正確的pAd-nm23-H1質粒經Pac Ⅰ線性化後轉染293細胞,包裝重組腺病毒Adeno-nm23-H1,併進行PCR鑒定及病毒滴度測定.結果PCR、酶切鑒定及測序結果證實pShuttleCMV-nm23-H1及pAd-nm23-H1質粒正確構建,收穫病毒後的PCR鑒定及DNA測序結果證明Adeno-nm23-H1包被成功且無野生型腺病毒產生.重組腺病毒Adeno-nm23-H1滴度為4.3×109/ml.結論成功構建瞭重組腺病毒載體Adeno-nm23-H1,為進一步研究nm23-H1抑製腫瘤轉移分子機製及基因治療奠定瞭基礎.
목적구건인종류전이억제기인nm23-H1적중조선병독재체.방법통과PCR방법이pcDNA3.1-nm23-H1위모판확증출편마152개안기산적nm23-H1기인,병련접입천사질립pShuttle-CMV.장함유목적기인적중조천사질립pShuttleCMV-nm23-H1경Pme Ⅰ선성화후전화입AdEasier-1감수태세포,용함류산잡나매소적LB배양기사선중조자,병용PCR급매절방법감정.감정정학적pAd-nm23-H1질립경Pac Ⅰ선성화후전염293세포,포장중조선병독Adeno-nm23-H1,병진행PCR감정급병독적도측정.결과PCR、매절감정급측서결과증실pShuttleCMV-nm23-H1급pAd-nm23-H1질립정학구건,수획병독후적PCR감정급DNA측서결과증명Adeno-nm23-H1포피성공차무야생형선병독산생.중조선병독Adeno-nm23-H1적도위4.3×109/ml.결론성공구건료중조선병독재체Adeno-nm23-H1,위진일보연구nm23-H1억제종류전이분자궤제급기인치료전정료기출.
