中华皮肤科杂志
中華皮膚科雜誌
중화피부과잡지
Chinese Journal of Dermatology
2003年
4期
181-184
,共4页
李承新%刘玉峰%王刚%李春英%万业宏%李巍
李承新%劉玉峰%王剛%李春英%萬業宏%李巍
리승신%류옥봉%왕강%리춘영%만업굉%리외
角蛋白%抗体%DNA,重组%基因
角蛋白%抗體%DNA,重組%基因
각단백%항체%DNA,중조%기인
目的用基因工程技术制备人源性抗角蛋白抗体单链抗体(single chain Fv,ScFv),并对其抗原结合特性等进行鉴定.方法利用基因重组技术对从半合成噬菌体抗体库中克隆的人源性抗角蛋白抗体Fab片段进行改造,获得了人源性抗角蛋白ScFv片段,并进行DNA序列分析.同时用ELISA法鉴定ScFv的抗原结合活性和特异性.结果DNA序列分析结果表明,单链抗体表达载体(pScFv)的Vk和VH基因序列同Fab片段的Vk和VH基因序列完全相同,表明在Fab片段改建成ScFv过程中未发生基因突变.可溶性表达的ScFv抗体能特异性地与角蛋白结合,而与其它抗原,如铁蛋白、胃蛋白酶、HBsAg等无关抗原不结合,说明人源性抗角蛋白Fab抗体改建为ScFv后具有较好的特异性,但可溶性表达的ScFv与角蛋白的结合活性低于可溶性Fab片段.结论成功表达并鉴定了人源性抗角蛋白的ScFv可溶性片段,为人源性抗角蛋白抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性并提高其临床应用价值奠定了基础.
目的用基因工程技術製備人源性抗角蛋白抗體單鏈抗體(single chain Fv,ScFv),併對其抗原結閤特性等進行鑒定.方法利用基因重組技術對從半閤成噬菌體抗體庫中剋隆的人源性抗角蛋白抗體Fab片段進行改造,穫得瞭人源性抗角蛋白ScFv片段,併進行DNA序列分析.同時用ELISA法鑒定ScFv的抗原結閤活性和特異性.結果DNA序列分析結果錶明,單鏈抗體錶達載體(pScFv)的Vk和VH基因序列同Fab片段的Vk和VH基因序列完全相同,錶明在Fab片段改建成ScFv過程中未髮生基因突變.可溶性錶達的ScFv抗體能特異性地與角蛋白結閤,而與其它抗原,如鐵蛋白、胃蛋白酶、HBsAg等無關抗原不結閤,說明人源性抗角蛋白Fab抗體改建為ScFv後具有較好的特異性,但可溶性錶達的ScFv與角蛋白的結閤活性低于可溶性Fab片段.結論成功錶達併鑒定瞭人源性抗角蛋白的ScFv可溶性片段,為人源性抗角蛋白抗體工程化、進一步研究該抗體的生物活性併提高其臨床應用價值奠定瞭基礎.
목적용기인공정기술제비인원성항각단백항체단련항체(single chain Fv,ScFv),병대기항원결합특성등진행감정.방법이용기인중조기술대종반합성서균체항체고중극륭적인원성항각단백항체Fab편단진행개조,획득료인원성항각단백ScFv편단,병진행DNA서렬분석.동시용ELISA법감정ScFv적항원결합활성화특이성.결과DNA서렬분석결과표명,단련항체표체재체(pScFv)적Vk화VH기인서렬동Fab편단적Vk화VH기인서렬완전상동,표명재Fab편단개건성ScFv과정중미발생기인돌변.가용성표체적ScFv항체능특이성지여각단백결합,이여기타항원,여철단백、위단백매、HBsAg등무관항원불결합,설명인원성항각단백Fab항체개건위ScFv후구유교호적특이성,단가용성표체적ScFv여각단백적결합활성저우가용성Fab편단.결론성공표체병감정료인원성항각단백적ScFv가용성편단,위인원성항각단백항체공정화、진일보연구해항체적생물활성병제고기림상응용개치전정료기출.
