CAJ | 학술논문

目的:观察白血病抑制因子(LIF)对体外培养的人胎脑神经干细胞增殖和分化的影响.方法:用添加表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)的N2培养基培养人神经干细胞(hNSC).实验分添加LIF(LIF+)组和无LIF(LIF-)组,接种12天后计数细胞集落(球)的形成率.传代培养观察120天,定期进行活细胞计数,绘制生长速率曲线.取第6代细胞球进行分化诱导,免疫荧光技术鉴别神经细胞的特异性抗原标志,并计算各细胞类型间的比例.结果:两组集落形成百分比分别为:LIF+为0.50%～0.91%;LIF-为0.49%～0.94%.两组间的差异并无显著意义(P＞0.05).在相同培养条件下,各例胎脑来源的NSC扩增速率的相差并无显著性意义(P＞0.05),但LIF对NSC扩增有重要作用,刺激细胞扩增了约4000～8 400倍,无分化发生;LIF-组仅为43～97倍,培养两个月后可观察到分化现象.在培养过程中观察到:LIF的作用主要表现在细胞接种传代约50～60天以后.用免疫细胞化学荧光进行分化细胞类型鉴定,计数神经元和星形胶细胞数,并计算其中神经元所占的百分比.LIF+培养为12%～83%,明显高于LIF-组的8%～23%(P＜0.005),来源于海马的NSC分化为神经元的比例要高于来源于纹状体的NSC.结论:LIF能阻抑人胎脑NSC的分化,促进其体外长期增殖,其效应主要表现在接种传代培养的50～60天以后.LIF还影响NSC的分化,可显著提高分化细胞中神经元的百分比,海马源性hNSC对LIF更为敏感.
목적:관찰백혈병억제인자(LIF)대체외배양적인태뇌신경간세포증식화분화적영향.방법:용첨가표피생장인자(EGF)화감성성섬유세포생장인자(FGF2)적N2배양기배양인신경간세포(hNSC).실험분첨가LIF(LIF+)조화무LIF(LIF-)조,접충12천후계수세포집락(구)적형성솔.전대배양관찰120천,정기진행활세포계수,회제생장속솔곡선.취제6대세포구진행분화유도,면역형광기술감별신경세포적특이성항원표지,병계산각세포류형간적비례.결과:량조집락형성백분비분별위:LIF+위0.50%～0.91%;LIF-위0.49%～0.94%.량조간적차이병무현저의의(P＞0.05).재상동배양조건하,각례태뇌래원적NSC확증속솔적상차병무현저성의의(P＞0.05),단LIF대NSC확증유중요작용,자격세포확증료약4000～8 400배,무분화발생;LIF-조부위43～97배,배양량개월후가관찰도분화현상.재배양과정중관찰도:LIF적작용주요표현재세포접충전대약50～60천이후.용면역세포화학형광진행분화세포류형감정,계수신경원화성형효세포수,병계산기중신경원소점적백분비.LIF+배양위12%～83%,명현고우LIF-조적8%～23%(P＜0.005),래원우해마적NSC분화위신경원적비례요고우래원우문상체적NSC.결론:LIF능조억인태뇌NSC적분화,촉진기체외장기증식,기효응주요표현재접충전대배양적50～60천이후.LIF환영향NSC적분화,가현저제고분화세포중신경원적백분비,해마원성hNSC대LIF경위민감.