临床肿瘤学杂志
臨床腫瘤學雜誌
림상종류학잡지
CHINESE CLINICAL ONCOLOGY
2006年
1期
7-10
,共4页
hnRNP A2/B1%cDNA制备
hnRNP A2/B1%cDNA製備
hnRNP A2/B1%cDNA제비
目的:为提取高纯度hnRNP A2/B1蛋白以满足制备特异性hnRNP A2/B1单克隆抗体的需要,特进行hnRNPA2/B1 cDNA制备.方法:采用PCR法从人平滑肌细胞克隆并扩增hnRNP A2/B1全长基因,新扩增的PCR反应物加入含有TOPO TA载体,TOPO克隆反应物2μl加入感受态大肠杆菌SOC介质中混匀培养、筛选、M13引物测序.结果:实验从20个白色菌落中经PCR扩增出基因片段,对其中6个克隆的质粒进行DNA序列测定,发现其中1个质粒含有特定的人hnRNP A2/B1基因序列.结论:采用PCR法可从人平滑肌细胞克隆、制备出hnRNP A2/B1全长基因cDNA,这将为提取高纯度hnRNPA2/B1蛋白、制备用于早期诊断肺癌的抗hnRNP A2/B1单克隆抗体具有重要意义.
目的:為提取高純度hnRNP A2/B1蛋白以滿足製備特異性hnRNP A2/B1單剋隆抗體的需要,特進行hnRNPA2/B1 cDNA製備.方法:採用PCR法從人平滑肌細胞剋隆併擴增hnRNP A2/B1全長基因,新擴增的PCR反應物加入含有TOPO TA載體,TOPO剋隆反應物2μl加入感受態大腸桿菌SOC介質中混勻培養、篩選、M13引物測序.結果:實驗從20箇白色菌落中經PCR擴增齣基因片段,對其中6箇剋隆的質粒進行DNA序列測定,髮現其中1箇質粒含有特定的人hnRNP A2/B1基因序列.結論:採用PCR法可從人平滑肌細胞剋隆、製備齣hnRNP A2/B1全長基因cDNA,這將為提取高純度hnRNPA2/B1蛋白、製備用于早期診斷肺癌的抗hnRNP A2/B1單剋隆抗體具有重要意義.
목적:위제취고순도hnRNP A2/B1단백이만족제비특이성hnRNP A2/B1단극륭항체적수요,특진행hnRNPA2/B1 cDNA제비.방법:채용PCR법종인평활기세포극륭병확증hnRNP A2/B1전장기인,신확증적PCR반응물가입함유TOPO TA재체,TOPO극륭반응물2μl가입감수태대장간균SOC개질중혼균배양、사선、M13인물측서.결과:실험종20개백색균락중경PCR확증출기인편단,대기중6개극륭적질립진행DNA서렬측정,발현기중1개질립함유특정적인hnRNP A2/B1기인서렬.결론:채용PCR법가종인평활기세포극륭、제비출hnRNP A2/B1전장기인cDNA,저장위제취고순도hnRNPA2/B1단백、제비용우조기진단폐암적항hnRNP A2/B1단극륭항체구유중요의의.
