CAJ | 학술논문

目的:建立兔气管纤毛上皮细胞原代培养模型,观察其体外培养条件下的生物学特性并确定其体外生长规律.方法:实验于2005-03/07在解放军第四军医大学唐都中心实验室完成. ①纤毛上皮细胞提取及培养:日本大耳兔20只,利用酶消化法分离获取兔气管纤毛上皮细胞,无血清生长因子培养基(成分:DMEM:Ham'sF12为1:1,并加入以下激素及生长因子:10 mg/L胰岛素、5 mg/L转铁蛋白、20μg/L甲状腺素、0.4 mg/L氢化可的松、7.5 mg/L内皮细胞生长支持物、25 μg/L表皮生长因子、1 mmol//L-谷氨酰胺,100IU/mL青霉素,50 mg/L链霉素)体外培养. ②细胞纯度及鉴定:用抗角蛋白单克隆抗体进行SP法免疫细胞化学反应,二氨基联苯胺显色阳性为上皮细胞.扫描电镜观察细胞表面结构.结果: ①气管上皮细胞的分离:酶低温消化加刷洗法获得的气管上皮细胞数量较多,呈圆形,较大,悬浮旋转. ②气管上皮细胞生长状态和形态特征:套皿接种细胞24 h后,贴壁率约为60%,细胞增大,并进入分裂相.五六天后细胞增殖旺盛,部分无纤毛上皮细胞汇合呈多角形铺路石样相嵌生长,在相差显微镜下放大200～400倍清晰可见纤毛呈海葵样向心摆动活跃,第3周纤毛逐渐消失成遗迹,细胞凋亡. ③纤毛细胞的电镜观察:可见纤毛由细胞顶膜伸出,大部分集结成束,除纤毛外,还有稠密的较细短的微绒毛由细胞顶膜伸出. ④气道上皮细胞的免疫细胞化学鉴定:抗角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色阳性,细胞达(91±3)%.结论:酶消化法分离、无血清生长因子培养基培养,可以建立兔气管纤毛上皮细胞的原代培养模型,具有成为气管组织工程种子细胞的应用价值.
목적:건립토기관섬모상피세포원대배양모형,관찰기체외배양조건하적생물학특성병학정기체외생장규률.방법:실험우2005-03/07재해방군제사군의대학당도중심실험실완성. ①섬모상피세포제취급배양:일본대이토20지,이용매소화법분리획취토기관섬모상피세포,무혈청생장인자배양기(성분:DMEM:Ham'sF12위1:1,병가입이하격소급생장인자:10 mg/L이도소、5 mg/L전철단백、20μg/L갑상선소、0.4 mg/L경화가적송、7.5 mg/L내피세포생장지지물、25 μg/L표피생장인자、1 mmol//L-곡안선알,100IU/mL청매소,50 mg/L련매소)체외배양. ②세포순도급감정:용항각단백단극륭항체진행SP법면역세포화학반응,이안기련분알현색양성위상피세포.소묘전경관찰세포표면결구.결과: ①기관상피세포적분리:매저온소화가쇄세법획득적기관상피세포수량교다,정원형,교대,현부선전. ②기관상피세포생장상태화형태특정:투명접충세포24 h후,첩벽솔약위60%,세포증대,병진입분렬상.오륙천후세포증식왕성,부분무섬모상피세포회합정다각형포로석양상감생장,재상차현미경하방대200～400배청석가견섬모정해규양향심파동활약,제3주섬모축점소실성유적,세포조망. ③섬모세포적전경관찰:가견섬모유세포정막신출,대부분집결성속,제섬모외,환유주밀적교세단적미융모유세포정막신출. ④기도상피세포적면역세포화학감정:항각단백단극륭항체면역조직화학염색양성,세포체(91±3)%.결론:매소화법분리、무혈청생장인자배양기배양,가이건립토기관섬모상피세포적원대배양모형,구유성위기관조직공정충자세포적응용개치.