解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2007年
7期
707-709
,共3页
金科华%赵亚华%罗德生%蒋智勇%崔红%周崎%赵长臣
金科華%趙亞華%囉德生%蔣智勇%崔紅%週崎%趙長臣
금과화%조아화%라덕생%장지용%최홍%주기%조장신
唾液富组蛋白5%念珠菌,白色%基因表达
唾液富組蛋白5%唸珠菌,白色%基因錶達
타액부조단백5%념주균,백색%기인표체
目的 在毕赤酵母中表达唾液富组蛋白5(HRP5)基因原始序列hrp5及突变序列hrp5'(Lys17→Asn),比较表达量及抗白色念珠菌活性.方法 选用毕赤酵母偏爱密码子,设计3'端互补、5'端带酶切位点的两对引物,PCR合成hrp5和hrp5',克隆至pPICZα-A,转化大肠杆菌,将酶切、测序鉴定的阳性重组质粒pPICZα-A-hrp5和pPICZα-A-hrp5'经Sac I线性化后电击转化GS115,筛选阳性菌落,PCR鉴定,甲醇诱导表达,比较抗菌活性,测定表达量.结果 hrp5及hrp 5'正确整合到GS115基因组中,突变前后表达产物与HRP5标准品活性相当,表达量分别为4μmol/L、5μmol/L.结论 HRP5在毕赤酵母中成功表达,活性区Lys17突变为Asn使表达量提高25%,而对其杀菌活性无影响.
目的 在畢赤酵母中錶達唾液富組蛋白5(HRP5)基因原始序列hrp5及突變序列hrp5'(Lys17→Asn),比較錶達量及抗白色唸珠菌活性.方法 選用畢赤酵母偏愛密碼子,設計3'耑互補、5'耑帶酶切位點的兩對引物,PCR閤成hrp5和hrp5',剋隆至pPICZα-A,轉化大腸桿菌,將酶切、測序鑒定的暘性重組質粒pPICZα-A-hrp5和pPICZα-A-hrp5'經Sac I線性化後電擊轉化GS115,篩選暘性菌落,PCR鑒定,甲醇誘導錶達,比較抗菌活性,測定錶達量.結果 hrp5及hrp 5'正確整閤到GS115基因組中,突變前後錶達產物與HRP5標準品活性相噹,錶達量分彆為4μmol/L、5μmol/L.結論 HRP5在畢赤酵母中成功錶達,活性區Lys17突變為Asn使錶達量提高25%,而對其殺菌活性無影響.
목적 재필적효모중표체타액부조단백5(HRP5)기인원시서렬hrp5급돌변서렬hrp5'(Lys17→Asn),비교표체량급항백색념주균활성.방법 선용필적효모편애밀마자,설계3'단호보、5'단대매절위점적량대인물,PCR합성hrp5화hrp5',극륭지pPICZα-A,전화대장간균,장매절、측서감정적양성중조질립pPICZα-A-hrp5화pPICZα-A-hrp5'경Sac I선성화후전격전화GS115,사선양성균락,PCR감정,갑순유도표체,비교항균활성,측정표체량.결과 hrp5급hrp 5'정학정합도GS115기인조중,돌변전후표체산물여HRP5표준품활성상당,표체량분별위4μmol/L、5μmol/L.결론 HRP5재필적효모중성공표체,활성구Lys17돌변위Asn사표체량제고25%,이대기살균활성무영향.
