CAJ | 학술논문

背景:钙离子参与神经信号的传递和神经递质的释放,脑海马神经干细胞的增殖过程必然和钙离子关系紧密,同时这一过程也反应在膜电位的变化上.目的:探讨中药三七总皂苷对脑损伤新牛鼠海马神经干细胞Ca2+和膜电位的影响.设计、时间及地点:离子水平,体外细胞学电生理观察,于2007-03/05在北京中医药大学细胞培养室完成.材料:清洁级新牛24 h内Wistar鼠16只.三七总皂苷为内蒙古康源药业有限公司产品,批号ZZ-5802-内卫药准字(1999)1787号,规格350g/10L.钙离子荧光探针Fluo3-AM、亲脂性阴离子荧光探针DiBAC4(3)为Sigma产品.方法:取新生鼠脑海马组织,采用无血清培养法分离扩增神经干细胞.设立3组:正常组细胞加入含糖Earle氏液,并始终在正常气体条件下培养:模型组、用药组细胞采用糖氧剥离法体外模拟脑缺血再灌注损伤,即加入无糖Earle氏液,将培养板放入缺氧罐内模拟脑缺血状态.用药组在换液时及脑缺血4h后分别加入17.5 mg/L三七总皂苷1.75 μ g.细胞内钙离子和膜电位分别用Fluo3-AM、DiBAC4(3)荧光探针进行标记.主要观察指标:神经干细胞Ca2+、膜电位荧光值的变化.结果:缺血冉灌注后30 min～1 h,正常组神经干细胞内Ca2+浓度呈上升趋势,至再灌注2 h胞内Ca2+浓度达到最高峰,再灌注3 h胞内Ca2+浓度开始降低:膜电位变化与Ca2+浓度变化完全相反.与正常组比较,模型组再灌注后30 min,1 h,2 h,3 h神经干细胞内Ca2+浓度均明显升高(P＜0.05～0.001),膜电位均明显下降(P＜0.001);经三七总皂苷处理町抑制Ca2+浓度升高(P＜0.05～0.01),并抑制膜电位下降(P＜0.05～0.001).结论:防止细胞内钙超载和细胞膜电位降低可能是三七总电苷保护损伤脑海马神经干细胞的作用机制之一.
배경:개리자삼여신경신호적전체화신경체질적석방,뇌해마신경간세포적증식과정필연화개리자관계긴밀,동시저일과정야반응재막전위적변화상.목적:탐토중약삼칠총조감대뇌손상신우서해마신경간세포Ca2+화막전위적영향.설계、시간급지점:리자수평,체외세포학전생리관찰,우2007-03/05재북경중의약대학세포배양실완성.재료:청길급신우24 h내Wistar서16지.삼칠총조감위내몽고강원약업유한공사산품,비호ZZ-5802-내위약준자(1999)1787호,규격350g/10L.개리자형광탐침Fluo3-AM、친지성음리자형광탐침DiBAC4(3)위Sigma산품.방법:취신생서뇌해마조직,채용무혈청배양법분리확증신경간세포.설립3조:정상조세포가입함당Earle씨액,병시종재정상기체조건하배양:모형조、용약조세포채용당양박리법체외모의뇌결혈재관주손상,즉가입무당Earle씨액,장배양판방입결양관내모의뇌결혈상태.용약조재환액시급뇌결혈4h후분별가입17.5 mg/L삼칠총조감1.75 μ g.세포내개리자화막전위분별용Fluo3-AM、DiBAC4(3)형광탐침진행표기.주요관찰지표:신경간세포Ca2+、막전위형광치적변화.결과:결혈염관주후30 min～1 h,정상조신경간세포내Ca2+농도정상승추세,지재관주2 h포내Ca2+농도체도최고봉,재관주3 h포내Ca2+농도개시강저:막전위변화여Ca2+농도변화완전상반.여정상조비교,모형조재관주후30 min,1 h,2 h,3 h신경간세포내Ca2+농도균명현승고(P＜0.05～0.001),막전위균명현하강(P＜0.001);경삼칠총조감처리정억제Ca2+농도승고(P＜0.05～0.01),병억제막전위하강(P＜0.05～0.001).결론:방지세포내개초재화세포막전위강저가능시삼칠총전감보호손상뇌해마신경간세포적작용궤제지일.