中国医学物理学杂志
中國醫學物理學雜誌
중국의학물이학잡지
CHINESE JOURNAL OF MEDICAL PHYSICS
2008年
5期
823-824,827
,共3页
豚鼠%耳蜗%外毛细胞%电位
豚鼠%耳蝸%外毛細胞%電位
돈서%이와%외모세포%전위
目的:为了观察了解豚鼠耳蜗外毛细胞内电位情况,从而进一步去探讨耳蜗活外毛细胞将声音由声能转化成电信号的机制.方法:将豚鼠断头活杀快速取出双侧颞骨听泡于Hank液中(pH7.4,渗透压300 moSm),在解剖显微镜下打开听泡及耳蜗,取出3-4回基底膜于浓度为0.25 mg/mL的Ⅳ型胶原酶(Sigma产品)中,在室温下消化10 min,用hank液洗涤2次以终止消化.取终止消化后的细胞悬液1 mL与等体积浓度为5 μmol的DiBAC4(3)(用Hank液配制)混合(终浓度为2.5 μmol),在37℃下避光染色20 min.取染色后的细胞悬液20μL加入预先涂有0.25 mg/mL多聚赖氨酸(sigma产品),在室温下干燥后的ACAS570特制培养皿中,使染色后的外毛细胞粘附于培养皿底部.选一活性良好、附壁牢固的外毛细胞,使用ACAS570在40x物镜下,动态观察膜电位探针DiBAC4(3)指示的外毛细胞内的荧光强度,共观察32个活性良好的外毛细胞,实验全过程均在室温(20℃～25℃)下完成,实验结束时细胞仍保持良好的活性.结果:豚鼠离体耳蜗活外毛细胞在Hank液中呈圆柱体并能保持良好的活性.用膜电位分子探针DiBAC4(3)染色后的外毛细胞内荧光强度不等,且位于细胞底部细胞核处荧光最强,位于细胞顶端的表皮板处荧光相对较弱,位于两者之间的散在区域荧光强度界于细胞核和表皮板之间.这些荧光强度不同的散在区域可能是各种具备单位膜结构的细胞器.提示豚鼠耳蜗离体活外毛细胞内各细胞器及细胞质内电位不同.结论:豚鼠耳蜗离体活外毛细胞内电位不同的各个部位分别是细胞核、表皮板及其他具备膜性结构的细胞器.这种各细胞器内电位呈梯度分布特征可能与外毛细胞完成声-电转换的需要密切相关.
目的:為瞭觀察瞭解豚鼠耳蝸外毛細胞內電位情況,從而進一步去探討耳蝸活外毛細胞將聲音由聲能轉化成電信號的機製.方法:將豚鼠斷頭活殺快速取齣雙側顳骨聽泡于Hank液中(pH7.4,滲透壓300 moSm),在解剖顯微鏡下打開聽泡及耳蝸,取齣3-4迴基底膜于濃度為0.25 mg/mL的Ⅳ型膠原酶(Sigma產品)中,在室溫下消化10 min,用hank液洗滌2次以終止消化.取終止消化後的細胞懸液1 mL與等體積濃度為5 μmol的DiBAC4(3)(用Hank液配製)混閤(終濃度為2.5 μmol),在37℃下避光染色20 min.取染色後的細胞懸液20μL加入預先塗有0.25 mg/mL多聚賴氨痠(sigma產品),在室溫下榦燥後的ACAS570特製培養皿中,使染色後的外毛細胞粘附于培養皿底部.選一活性良好、附壁牢固的外毛細胞,使用ACAS570在40x物鏡下,動態觀察膜電位探針DiBAC4(3)指示的外毛細胞內的熒光彊度,共觀察32箇活性良好的外毛細胞,實驗全過程均在室溫(20℃～25℃)下完成,實驗結束時細胞仍保持良好的活性.結果:豚鼠離體耳蝸活外毛細胞在Hank液中呈圓柱體併能保持良好的活性.用膜電位分子探針DiBAC4(3)染色後的外毛細胞內熒光彊度不等,且位于細胞底部細胞覈處熒光最彊,位于細胞頂耑的錶皮闆處熒光相對較弱,位于兩者之間的散在區域熒光彊度界于細胞覈和錶皮闆之間.這些熒光彊度不同的散在區域可能是各種具備單位膜結構的細胞器.提示豚鼠耳蝸離體活外毛細胞內各細胞器及細胞質內電位不同.結論:豚鼠耳蝸離體活外毛細胞內電位不同的各箇部位分彆是細胞覈、錶皮闆及其他具備膜性結構的細胞器.這種各細胞器內電位呈梯度分佈特徵可能與外毛細胞完成聲-電轉換的需要密切相關.
목적:위료관찰료해돈서이와외모세포내전위정황,종이진일보거탐토이와활외모세포장성음유성능전화성전신호적궤제.방법:장돈서단두활살쾌속취출쌍측섭골은포우Hank액중(pH7.4,삼투압300 moSm),재해부현미경하타개은포급이와,취출3-4회기저막우농도위0.25 mg/mL적Ⅳ형효원매(Sigma산품)중,재실온하소화10 min,용hank액세조2차이종지소화.취종지소화후적세포현액1 mL여등체적농도위5 μmol적DiBAC4(3)(용Hank액배제)혼합(종농도위2.5 μmol),재37℃하피광염색20 min.취염색후적세포현액20μL가입예선도유0.25 mg/mL다취뢰안산(sigma산품),재실온하간조후적ACAS570특제배양명중,사염색후적외모세포점부우배양명저부.선일활성량호、부벽뢰고적외모세포,사용ACAS570재40x물경하,동태관찰막전위탐침DiBAC4(3)지시적외모세포내적형광강도,공관찰32개활성량호적외모세포,실험전과정균재실온(20℃～25℃)하완성,실험결속시세포잉보지량호적활성.결과:돈서리체이와활외모세포재Hank액중정원주체병능보지량호적활성.용막전위분자탐침DiBAC4(3)염색후적외모세포내형광강도불등,차위우세포저부세포핵처형광최강,위우세포정단적표피판처형광상대교약,위우량자지간적산재구역형광강도계우세포핵화표피판지간.저사형광강도불동적산재구역가능시각충구비단위막결구적세포기.제시돈서이와리체활외모세포내각세포기급세포질내전위불동.결론:돈서이와리체활외모세포내전위불동적각개부위분별시세포핵、표피판급기타구비막성결구적세포기.저충각세포기내전위정제도분포특정가능여외모세포완성성-전전환적수요밀절상관.
