激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2011年
2期
230-235
,共6页
鸡IL-2基因%NDV-F蛋白%多抗原表位%融合蛋白
鷄IL-2基因%NDV-F蛋白%多抗原錶位%融閤蛋白
계IL-2기인%NDV-F단백%다항원표위%융합단백
研究鸡白细胞介素-2(chicken interleukin-2,ChlL-2)的免疫佐剂功能,构建ChlL-2与新城疫病毒F蛋白多抗原表位(NDV-F)的嵌合基因,以对鸡新城疫疫病进行防治.采用重叠延伸PCR方法通过基因柔性接头将ChlL-2基因和NDV-F多抗原表位基因构建成ChL-2-linker-NDV-F嵌合基因并克隆入PET-32a载体,经测序鉴定后,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His融合蛋白,Ni2+亲和柱纯化,表达产物经SDS-PAGE、Western blot 和间接ELISA检测和鉴定.结果表明,实验成功构建并克隆了ChlL-2-linker-NDV-F嵌合基因,嵌合基因在大肠杆菌中表达的ChlL-2-1inker-NDV-F融合蛋白分子量约为48 kD,表达量约占菌体蛋白总量的45%,纯化后的ChlL-2.1inker-NDV-F融合蛋白能与感染NDV的鸡血清发生反应.上述结果证明ChlL-2-linker-NDV-F嵌合基因在原核细胞中能有效表达,且融合蛋白具有较强的特异性和免疫原性.
研究鷄白細胞介素-2(chicken interleukin-2,ChlL-2)的免疫佐劑功能,構建ChlL-2與新城疫病毒F蛋白多抗原錶位(NDV-F)的嵌閤基因,以對鷄新城疫疫病進行防治.採用重疊延伸PCR方法通過基因柔性接頭將ChlL-2基因和NDV-F多抗原錶位基因構建成ChL-2-linker-NDV-F嵌閤基因併剋隆入PET-32a載體,經測序鑒定後,轉化BL21大腸桿菌,IPTG誘導錶達6×His融閤蛋白,Ni2+親和柱純化,錶達產物經SDS-PAGE、Western blot 和間接ELISA檢測和鑒定.結果錶明,實驗成功構建併剋隆瞭ChlL-2-linker-NDV-F嵌閤基因,嵌閤基因在大腸桿菌中錶達的ChlL-2-1inker-NDV-F融閤蛋白分子量約為48 kD,錶達量約佔菌體蛋白總量的45%,純化後的ChlL-2.1inker-NDV-F融閤蛋白能與感染NDV的鷄血清髮生反應.上述結果證明ChlL-2-linker-NDV-F嵌閤基因在原覈細胞中能有效錶達,且融閤蛋白具有較彊的特異性和免疫原性.
연구계백세포개소-2(chicken interleukin-2,ChlL-2)적면역좌제공능,구건ChlL-2여신성역병독F단백다항원표위(NDV-F)적감합기인,이대계신성역역병진행방치.채용중첩연신PCR방법통과기인유성접두장ChlL-2기인화NDV-F다항원표위기인구건성ChL-2-linker-NDV-F감합기인병극륭입PET-32a재체,경측서감정후,전화BL21대장간균,IPTG유도표체6×His융합단백,Ni2+친화주순화,표체산물경SDS-PAGE、Western blot 화간접ELISA검측화감정.결과표명,실험성공구건병극륭료ChlL-2-linker-NDV-F감합기인,감합기인재대장간균중표체적ChlL-2-1inker-NDV-F융합단백분자량약위48 kD,표체량약점균체단백총량적45%,순화후적ChlL-2.1inker-NDV-F융합단백능여감염NDV적계혈청발생반응.상술결과증명ChlL-2-linker-NDV-F감합기인재원핵세포중능유효표체,차융합단백구유교강적특이성화면역원성.
