中国呼吸与危重监护杂志
中國呼吸與危重鑑護雜誌
중국호흡여위중감호잡지
CHINESE JOURANL OF RESPIRATORY AND CRITICAL CARE MEDICINE
2012年
1期
46-51
,共6页
吴炜景%李理%袁伟锋%李伟峰%黄文杰
吳煒景%李理%袁偉鋒%李偉峰%黃文傑
오위경%리리%원위봉%리위봉%황문걸
核因子KB%RNA干扰%氧化应激%炎症
覈因子KB%RNA榦擾%氧化應激%炎癥
핵인자KB%RNA간우%양화응격%염증
目的 建立急性肺损伤肺泡上皮细胞炎症模型,探讨NF-kB p65基因在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用.方法 以肿瘤坏死因子α(TNF-α,10 ng/mL)刺激A549细胞,运用RNA干扰技术沉默核因子KB(NF-KB)p65基因,采用RT-PCR及Western blot法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中自细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-6等炎症因子浓度,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)浓度,MTT法检测细胞存活率.结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因及蛋白水平上调NF-KB p65的表达,并增加NF-kB蛋白的核转位；同时细胞培养上清中IL-1β、IL-4、IL-6的浓度升高,细胞内MDA增多,SOD减少,细胞存活率降低.预转染NF-kB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-kB p65表达,降低TNF-α诱导的上述各炎症因子及MDA浓度的增高,减少SOD的耗损,A549细胞存活率升高(P＜0.05).结论 NF-kB能介导TNF-α触发的过度炎症反应和氧化应激,导致细胞存活率明显降低；沉默NF-kB p65基因可有效下调炎症反应水平及其诱发的氧化应激,减轻肺结构细胞的损伤.
目的 建立急性肺損傷肺泡上皮細胞炎癥模型,探討NF-kB p65基因在炎癥誘導的氧化應激損傷中的作用.方法 以腫瘤壞死因子α(TNF-α,10 ng/mL)刺激A549細胞,運用RNA榦擾技術沉默覈因子KB(NF-KB)p65基因,採用RT-PCR及Western blot法檢測沉默效率,ELISA法檢測細胞培養上清中自細胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-6等炎癥因子濃度,比色法檢測細胞內丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)濃度,MTT法檢測細胞存活率.結果 TNF-α刺激A549細胞可在基因及蛋白水平上調NF-KB p65的錶達,併增加NF-kB蛋白的覈轉位；同時細胞培養上清中IL-1β、IL-4、IL-6的濃度升高,細胞內MDA增多,SOD減少,細胞存活率降低.預轉染NF-kB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-kB p65錶達,降低TNF-α誘導的上述各炎癥因子及MDA濃度的增高,減少SOD的耗損,A549細胞存活率升高(P＜0.05).結論 NF-kB能介導TNF-α觸髮的過度炎癥反應和氧化應激,導緻細胞存活率明顯降低；沉默NF-kB p65基因可有效下調炎癥反應水平及其誘髮的氧化應激,減輕肺結構細胞的損傷.
목적 건립급성폐손상폐포상피세포염증모형,탐토NF-kB p65기인재염증유도적양화응격손상중적작용.방법 이종류배사인자α(TNF-α,10 ng/mL)자격A549세포,운용RNA간우기술침묵핵인자KB(NF-KB)p65기인,채용RT-PCR급Western blot법검측침묵효솔,ELISA법검측세포배양상청중자세포개소1β(IL-1β)、IL-4、IL-6등염증인자농도,비색법검측세포내병이철(MDA)급초양화물기화매(SOD)농도,MTT법검측세포존활솔.결과 TNF-α자격A549세포가재기인급단백수평상조NF-KB p65적표체,병증가NF-kB단백적핵전위；동시세포배양상청중IL-1β、IL-4、IL-6적농도승고,세포내MDA증다,SOD감소,세포존활솔강저.예전염NF-kB p65 siRNA가재기인수평급단백수평유효침묵NF-kB p65표체,강저TNF-α유도적상술각염증인자급MDA농도적증고,감소SOD적모손,A549세포존활솔승고(P＜0.05).결론 NF-kB능개도TNF-α촉발적과도염증반응화양화응격,도치세포존활솔명현강저；침묵NF-kB p65기인가유효하조염증반응수평급기유발적양화응격,감경폐결구세포적손상.
