华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2012年
2期
177-180
,共4页
郭凯文%邱文洪%艾永循%钟伟%易路阳%宰文欣
郭凱文%邱文洪%艾永循%鐘偉%易路暘%宰文訢
곽개문%구문홍%애영순%종위%역로양%재문흔
半乳糖苷结合凝集素-9%构建%表达%重组质粒
半乳糖苷結閤凝集素-9%構建%錶達%重組質粒
반유당감결합응집소-9%구건%표체%중조질립
目的 构建人半乳糖苷结合凝集素-9(Galectin-9)的真核表达质粒pGalectin-9,并检测其表达.方法 通过DNA重组技术和PCR方法 从人外周血单个核细胞克隆Galectin-9基因,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pGalectin-9瞬时转染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法 检测Galectin-9的表达.结果 DNA测序和酶切鉴定证明Galectin-9基因正确克隆至pcDNA3.1(+)的多克隆位点;以重组质粒pGalectin-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法,在分子和细胞水平证实Galectin-9的表达.结论 成功构建pGalectin-9的重组质粒,并证实其在CHO细胞中可以成功表达.
目的 構建人半乳糖苷結閤凝集素-9(Galectin-9)的真覈錶達質粒pGalectin-9,併檢測其錶達.方法 通過DNA重組技術和PCR方法 從人外週血單箇覈細胞剋隆Galectin-9基因,插入真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)中,通過PCR、酶切及測序鑒定重組載體的正確性;採用脂質體轉染技術將重組質粒pGalectin-9瞬時轉染中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)細胞,通過Western blot、RT-PCR和間接免疫熒光方法 檢測Galectin-9的錶達.結果 DNA測序和酶切鑒定證明Galectin-9基因正確剋隆至pcDNA3.1(+)的多剋隆位點;以重組質粒pGalectin-9瞬時轉染CHO細胞,通過Western blot、RT-PCR和間接免疫熒光方法,在分子和細胞水平證實Galectin-9的錶達.結論 成功構建pGalectin-9的重組質粒,併證實其在CHO細胞中可以成功錶達.
목적 구건인반유당감결합응집소-9(Galectin-9)적진핵표체질립pGalectin-9,병검측기표체.방법 통과DNA중조기술화PCR방법 종인외주혈단개핵세포극륭Galectin-9기인,삽입진핵표체질립pcDNA3.1(+)중,통과PCR、매절급측서감정중조재체적정학성;채용지질체전염기술장중조질립pGalectin-9순시전염중국창서란소(Chinese hamster ovary,CHO)세포,통과Western blot、RT-PCR화간접면역형광방법 검측Galectin-9적표체.결과 DNA측서화매절감정증명Galectin-9기인정학극륭지pcDNA3.1(+)적다극륭위점;이중조질립pGalectin-9순시전염CHO세포,통과Western blot、RT-PCR화간접면역형광방법,재분자화세포수평증실Galectin-9적표체.결론 성공구건pGalectin-9적중조질립,병증실기재CHO세포중가이성공표체.
