CAJ | 학술논문

目的:建立基于光镜表型的促胚胎干( embryonic stem,ES)细胞神经元亚型分化药物筛选法,供早期发现促神经再生药初筛用.方法:采用悬滴培养4 -/4+法,形成拟胚体,继而贴壁培养向神经细胞分化,光镜确认表型呈神经元样的基础上进一步评价各类亚型.以10-7 mol/L异补骨脂甲素( Isobavachin,IBA)和10 -6mol/L淫羊藿苷(Icariin,ICA)为例,分化终点以光镜下轴突为胞体三倍长以上者为神经元样细胞,继续以免疫荧光成像法确认神经元(β-tubulin Ⅲ 阳染),并进一步以特异性抗体( ChAT、GABA)阳染共定位鉴别相应神经元亚型.结果:基于光镜表型评价,在分化终点即可剔除轴突分化不全的细胞,取代了以往免疫荧光成像所需的人力、物力与时间；并避免进一步ELISA或流式细胞术评价的假阳性.光镜显示IBA处理者大部分显示神经元样表型,而ICA处理的细胞却不然,免疫荧光成像结果与此相一致.因此,仅对IBA处理的神经元做亚型鉴定,显示胆碱能神经元以及γ-氨基丁酸能神经元亚型.结论:基于光镜表型的促神经元分化初筛法在化合物促神经元亚型分化上具有简便易行、节约物力与时间,避免假阳性的独到之处;经该法初筛后供后续研究,可见IBA具有促胆碱能和γ-氨基丁酸能神经元分化活性.
목적:건립기우광경표형적촉배태간( embryonic stem,ES)세포신경원아형분화약물사선법,공조기발현촉신경재생약초사용.방법:채용현적배양4 -/4+법,형성의배체,계이첩벽배양향신경세포분화,광경학인표형정신경원양적기출상진일보평개각류아형.이10-7 mol/L이보골지갑소( Isobavachin,IBA)화10 -6mol/L음양곽감(Icariin,ICA)위례,분화종점이광경하축돌위포체삼배장이상자위신경원양세포,계속이면역형광성상법학인신경원(β-tubulin Ⅲ 양염),병진일보이특이성항체( ChAT、GABA)양염공정위감별상응신경원아형.결과:기우광경표형평개,재분화종점즉가척제축돌분화불전적세포,취대료이왕면역형광성상소수적인력、물력여시간；병피면진일보ELISA혹류식세포술평개적가양성.광경현시IBA처리자대부분현시신경원양표형,이ICA처리적세포각불연,면역형광성상결과여차상일치.인차,부대IBA처리적신경원주아형감정,현시담감능신경원이급γ-안기정산능신경원아형.결론:기우광경표형적촉신경원분화초사법재화합물촉신경원아형분화상구유간편역행、절약물력여시간,피면가양성적독도지처;경해법초사후공후속연구,가견IBA구유촉담감능화γ-안기정산능신경원분화활성.