生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2006年
4期
18-20
,共3页
高彦茹%潘善培%谢琪璇%肖銮娟%柯琼
高彥茹%潘善培%謝琪璇%肖鑾娟%柯瓊
고언여%반선배%사기선%초란연%가경
重组猪卵透明带-3α抗原%毕赤酵母%抗体%抑制作用
重組豬卵透明帶-3α抗原%畢赤酵母%抗體%抑製作用
중조저란투명대-3α항원%필적효모%항체%억제작용
目的:制备重组猪卵透明带-3α(rpZP3α)抗原及其抗体供发展避孕疫苗研究.方法:在2L发酵罐中接种毕赤酵母GS115-pZP3α工程菌,高密度发酵表达rpZP3α蛋白,表达的蛋白经螯合镍离子的亲和柱纯化后,用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,以Quantity One软件对rpZP3α进行定量分析.rpZP3α免疫家兔,间接免疫荧光法检测抗血清对rpZP3α和猪卵透明带的抗体反应.IVF试验体外检测抗rpZP3α抗体对猪、小鼠精卵结合的影响作用.结果:工程菌高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pZP3抗体反应的46kD成分,平均产量为8mg/L,用其免疫家兔获得抗rpZP3α抗血清,间接免疫荧光法分析显示此抗血清能与猪卵透明带反应,产生亮绿荧光.体外精卵结合试验中,随着兔抗rpZP3α抗血清浓度的加大,其对猪、鼠精卵结合的抑制作用也增强.ELISA结果显示抗rpZP3α抗体与rpZP3α蛋白以及天然pZP3蛋白两种抗原反应的强度和趋势基本一致.结论:通过酵母体系制备的rpZP3α及其抗体具有免疫学活性.
目的:製備重組豬卵透明帶-3α(rpZP3α)抗原及其抗體供髮展避孕疫苗研究.方法:在2L髮酵罐中接種畢赤酵母GS115-pZP3α工程菌,高密度髮酵錶達rpZP3α蛋白,錶達的蛋白經螯閤鎳離子的親和柱純化後,用SDS-PAGE和Western blot進行鑒定,以Quantity One軟件對rpZP3α進行定量分析.rpZP3α免疫傢兔,間接免疫熒光法檢測抗血清對rpZP3α和豬卵透明帶的抗體反應.IVF試驗體外檢測抗rpZP3α抗體對豬、小鼠精卵結閤的影響作用.結果:工程菌高密度髮酵產物經分離純化後穫得能與抗pZP3抗體反應的46kD成分,平均產量為8mg/L,用其免疫傢兔穫得抗rpZP3α抗血清,間接免疫熒光法分析顯示此抗血清能與豬卵透明帶反應,產生亮綠熒光.體外精卵結閤試驗中,隨著兔抗rpZP3α抗血清濃度的加大,其對豬、鼠精卵結閤的抑製作用也增彊.ELISA結果顯示抗rpZP3α抗體與rpZP3α蛋白以及天然pZP3蛋白兩種抗原反應的彊度和趨勢基本一緻.結論:通過酵母體繫製備的rpZP3α及其抗體具有免疫學活性.
목적:제비중조저란투명대-3α(rpZP3α)항원급기항체공발전피잉역묘연구.방법:재2L발효관중접충필적효모GS115-pZP3α공정균,고밀도발효표체rpZP3α단백,표체적단백경오합얼리자적친화주순화후,용SDS-PAGE화Western blot진행감정,이Quantity One연건대rpZP3α진행정량분석.rpZP3α면역가토,간접면역형광법검측항혈청대rpZP3α화저란투명대적항체반응.IVF시험체외검측항rpZP3α항체대저、소서정란결합적영향작용.결과:공정균고밀도발효산물경분리순화후획득능여항pZP3항체반응적46kD성분,평균산량위8mg/L,용기면역가토획득항rpZP3α항혈청,간접면역형광법분석현시차항혈청능여저란투명대반응,산생량록형광.체외정란결합시험중,수착토항rpZP3α항혈청농도적가대,기대저、서정란결합적억제작용야증강.ELISA결과현시항rpZP3α항체여rpZP3α단백이급천연pZP3단백량충항원반응적강도화추세기본일치.결론:통과효모체계제비적rpZP3α급기항체구유면역학활성.
