CAJ | 학술논문

目的观察TNF-α对睾丸细胞功能的影响并探讨其可能机制.方法通过Percoll不连续密度梯度分离获取大鼠Leydig细胞进行原代培养.HE染色进行细胞形态学观察.Leydig细胞培养48h后在培养液中分别加入不同浓度的大鼠TNF-α,使其终浓度达到0.1、1、10、100ng/ml,分别在培养的第1、2、3、4天取上清,通过放免法测定上清液中睾酮的含量,应用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞术与丫啶橙(AO)染色检测及观察Leydig细胞凋亡情况.结果原代细胞通过提纯后的细胞纯度可达70%～80%.HE染色后可见细胞胞质含量丰富,含有分泌颗粒,胞核圆.TNF-α在0.1～100ng/ml浓度范围内能呈剂量依赖的方式抑制Leydig细胞睾酮的基础分泌.0.1、1、10、100ng/ml TNF-α作用24h后,对Leydig细胞睾酮分泌量的抑制率分别为22.03%、34.98%、52.95%、74.83%.各组Leydig细胞睾酮的分泌量随时间延长呈减少的趋势,但除100ng/ml组外,其他各组各时间点比较差异无统计学意义.高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组具有抑制Leydig细胞增殖和促进其凋亡作用,其增殖抑制率分别达到38.35%±4.17%、76.35%±8.65%,而凋亡率分别为13.23%±1.11%、26.43%±5.82%,与对照组比较有统计学意义(P＜0.01).AO染色见高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组出现明显的细胞凋亡.结论 TNF-α对Leydig细胞睾酮的基础分泌具有抑制作用,在较高浓度时该作用可能与其抑制Leydig细胞增殖并促进细胞凋亡有相关.
목적 관찰TNF-α대고환세포공능적영향병탐토기가능궤제.방법 통과Percoll불련속밀도제도분리획취대서Leydig세포진행원대배양.HE염색진행세포형태학관찰.Leydig세포배양48h후재배양액중분별가입불동농도적대서TNF-α,사기종농도체도0.1、1、10、100ng/ml,분별재배양적제1、2、3、4천취상청,통과방면법측정상청액중고동적함량,응용MTT법측정세포증식정황,류식세포술여아정등(AO)염색검측급관찰Leydig세포조망정황.결과 원대세포통과제순후적세포순도가체70%～80%.HE염색후가견세포포질함량봉부,함유분비과립,포핵원.TNF-α재0.1～100ng/ml농도범위내능정제량의뢰적방식억제Leydig세포고동적기출분비.0.1、1、10、100ng/ml TNF-α작용24h후,대Leydig세포고동분비량적억제솔분별위22.03%、34.98%、52.95%、74.83%.각조Leydig세포고동적분비량수시간연장정감소적추세,단제100ng/ml조외,기타각조각시간점비교차이무통계학의의.고농도TNF-α(10、100ng/ml)조구유억제Leydig세포증식화촉진기조망작용,기증식억제솔분별체도38.35%±4.17%、76.35%±8.65%,이조망솔분별위13.23%±1.11%、26.43%±5.82%,여대조조비교유통계학의의(P＜0.01).AO염색견고농도TNF-α(10、100ng/ml)조출현명현적세포조망.결론 TNF-α대Leydig세포고동적기출분비구유억제작용,재교고농도시해작용가능여기억제Leydig세포증식병촉진세포조망유상관.