CAJ | 학술논문

泛素结合酶(E2)是蛋白泛素化修饰所需的第二个连接酶,在泛素转移和底物特异性识别过程中发挥着重要作用.UBE2W是一种新发现的E2酶,其果蝇属同源蛋白可能在光转导或视网膜变性过程中发挥作用,鼠和人同源蛋白功能未见报道.生物信息学分析UBE2W鼠源氨基酸序列.发现UBE2W具有典型的UBC结构域并在多种物种高度保守.通过构建UBE2W原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了GST-UBE2W融合蛋白,以此纯化蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗UBE2W多抗血清,并利用制备的UBE2W抗原柱亲和纯化UBE2W多抗.为了检测纯化抗体特异性,在真核细胞中瞬时表达了myc-UBE2W融合蛋白,分别用myc单抗和UBE2W多抗进行Western blotting分析,结果表明获得了特异性的UBE2W抗体.利用此特异性抗体在小鼠脑、心脏,肾脏、肝脏、肺、肌肉、脾脏和睾丸等组织中均检测到了UBE2W的表达,且在小鼠睾丸中成年期表达最高.
범소결합매(E2)시단백범소화수식소수적제이개련접매,재범소전이화저물특이성식별과정중발휘착중요작용.UBE2W시일충신발현적E2매,기과승속동원단백가능재광전도혹시망막변성과정중발휘작용,서화인동원단백공능미견보도.생물신식학분석UBE2W서원안기산서렬.발현UBE2W구유전형적UBC결구역병재다충물충고도보수.통과구건UBE2W원핵표체질립,재대장간균중표체병순화료GST-UBE2W융합단백,이차순화단백작위항원면역신서란백토제비항UBE2W다항혈청,병이용제비적UBE2W항원주친화순화UBE2W다항.위료검측순화항체특이성,재진핵세포중순시표체료myc-UBE2W융합단백,분별용myc단항화UBE2W다항진행Western blotting분석,결과표명획득료특이성적UBE2W항체.이용차특이성항체재소서뇌、심장,신장、간장、폐、기육、비장화고환등조직중균검측도료UBE2W적표체,차재소서고환중성년기표체최고.