中国农业科学
中國農業科學
중국농업과학
SCIENTIA AGRICULTURA SINICA
2008年
4期
1040-1047
,共8页
马铃薯Y病毒%黄瓜花叶病毒%烟草花叶病毒%转基因烟草%多病毒抗性
馬鈴藷Y病毒%黃瓜花葉病毒%煙草花葉病毒%轉基因煙草%多病毒抗性
마령서Y병독%황과화협병독%연초화협병독%전기인연초%다병독항성
[目的]利用RNA介导抗性培育抗多种植物病毒的转基因烟草.[方法]分别以马铃薯Y病毒(PVY)、烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)全长衣壳蛋白(CP)基因为模板,通过设计PCR引物和亚克隆获得PVY CP 3'端长度100bp、TMV CP 3'端长度100bp和CMV CP 3'端长度200bp的cDNA片段并拼接成嵌合基因,并以此为模板构建反向重复结构嵌合基因的植物表达载体pRHPTC.将pRHPTC通过冻融法导入农杆菌LBA4404,采用叶盘法转化烟草NC89,然后测定转基因烟草对3种病毒的抗性.[结果]经卡那霉素筛选和PCR检测,共获得276株转基因烟草.Southern和Northern blot分析表明,外源基因以不同拷贝数整合于烟草基因组中;不同转基因植株中病毒RNA的积累量存在显著差异.抗病性检测显示:23%左右的转基因植株表现出对3种病毒侵染的抗性.对转基因植株扩繁后代和T1代的抗性分析表明:多病毒抗性表现稳定.[结论]利用RNA介导的抗病毒基因工程可获得同时抗多种病毒的转基因烟草,其抗病性在T0代扩繁植株和T1代植株中得到稳定遗传.
[目的]利用RNA介導抗性培育抗多種植物病毒的轉基因煙草.[方法]分彆以馬鈴藷Y病毒(PVY)、煙草花葉病毒(TMV)和黃瓜花葉病毒(CMV)全長衣殼蛋白(CP)基因為模闆,通過設計PCR引物和亞剋隆穫得PVY CP 3'耑長度100bp、TMV CP 3'耑長度100bp和CMV CP 3'耑長度200bp的cDNA片段併拼接成嵌閤基因,併以此為模闆構建反嚮重複結構嵌閤基因的植物錶達載體pRHPTC.將pRHPTC通過凍融法導入農桿菌LBA4404,採用葉盤法轉化煙草NC89,然後測定轉基因煙草對3種病毒的抗性.[結果]經卡那黴素篩選和PCR檢測,共穫得276株轉基因煙草.Southern和Northern blot分析錶明,外源基因以不同拷貝數整閤于煙草基因組中;不同轉基因植株中病毒RNA的積纍量存在顯著差異.抗病性檢測顯示:23%左右的轉基因植株錶現齣對3種病毒侵染的抗性.對轉基因植株擴繁後代和T1代的抗性分析錶明:多病毒抗性錶現穩定.[結論]利用RNA介導的抗病毒基因工程可穫得同時抗多種病毒的轉基因煙草,其抗病性在T0代擴繁植株和T1代植株中得到穩定遺傳.
[목적]이용RNA개도항성배육항다충식물병독적전기인연초.[방법]분별이마령서Y병독(PVY)、연초화협병독(TMV)화황과화협병독(CMV)전장의각단백(CP)기인위모판,통과설계PCR인물화아극륭획득PVY CP 3'단장도100bp、TMV CP 3'단장도100bp화CMV CP 3'단장도200bp적cDNA편단병병접성감합기인,병이차위모판구건반향중복결구감합기인적식물표체재체pRHPTC.장pRHPTC통과동융법도입농간균LBA4404,채용협반법전화연초NC89,연후측정전기인연초대3충병독적항성.[결과]경잡나매소사선화PCR검측,공획득276주전기인연초.Southern화Northern blot분석표명,외원기인이불동고패수정합우연초기인조중;불동전기인식주중병독RNA적적루량존재현저차이.항병성검측현시:23%좌우적전기인식주표현출대3충병독침염적항성.대전기인식주확번후대화T1대적항성분석표명:다병독항성표현은정.[결론]이용RNA개도적항병독기인공정가획득동시항다충병독적전기인연초,기항병성재T0대확번식주화T1대식주중득도은정유전.
