河北医药
河北醫藥
하북의약
HEBEI MEDICAL JOURNAL
2008年
8期
1093-1095
,共3页
华正祥%卢冬梅%张秀芹%冯永路
華正祥%盧鼕梅%張秀芹%馮永路
화정상%로동매%장수근%풍영로
FasL%反义RNA%TE11细胞
FasL%反義RNA%TE11細胞
FasL%반의RNA%TE11세포
目的 采用反义RNA技术,构建人FasL反义RNA重组逆转录病毒载体.以FasL表达阳性的人食管癌细胞株TE11为模型,研究反义RNA重组逆转录病毒表达载体对细胞FasL的阻断作用.方法 将人FasL全基因序列的DNA片段反向插入逆转录病毒pLXSN质粒上的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ位点间,建立重组质粒pL(FasL-AS)SN.将pL(FasL-AS)SN导入包装细胞PA317中,经G418筛选后收获培养上清,转染TE11细胞,建立TE11-hFasL-AS细胞系.用PCR技术检测pL(FasL-AS)SN中目的基因FasL的插入及其在TE11细胞中的整合;用RT-PCR法检测TE11细胞经重组病毒感染前后FasL mRAN表达量的变化;采用流式细胞仪检测TE11和TE11-hFasL-AS细胞FasL的表达及其对U937细胞凋亡的诱导.结果 将pL(FasL-AS)SN转染TE11细胞后,FasL反义RNA已整合至TEll细胞(TE11-hFasL-AS)中;TE11-hFasL-AS细胞FasL mRAN及蛋白的表达水平均显著下降(P＜0.01);与TE11-hFasL-AS细胞混合培养后,U937细胞凋亡率明显低于未转染组(P＜0.01).结论 成功构建了人FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体,用该载体转染的TE11细胞中FasL的表达水平明显受抑,为Fas/FasL参与的体内许多病理进程的机制研究及临床应用提供实验基础.
目的 採用反義RNA技術,構建人FasL反義RNA重組逆轉錄病毒載體.以FasL錶達暘性的人食管癌細胞株TE11為模型,研究反義RNA重組逆轉錄病毒錶達載體對細胞FasL的阻斷作用.方法 將人FasL全基因序列的DNA片段反嚮插入逆轉錄病毒pLXSN質粒上的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ位點間,建立重組質粒pL(FasL-AS)SN.將pL(FasL-AS)SN導入包裝細胞PA317中,經G418篩選後收穫培養上清,轉染TE11細胞,建立TE11-hFasL-AS細胞繫.用PCR技術檢測pL(FasL-AS)SN中目的基因FasL的插入及其在TE11細胞中的整閤;用RT-PCR法檢測TE11細胞經重組病毒感染前後FasL mRAN錶達量的變化;採用流式細胞儀檢測TE11和TE11-hFasL-AS細胞FasL的錶達及其對U937細胞凋亡的誘導.結果 將pL(FasL-AS)SN轉染TE11細胞後,FasL反義RNA已整閤至TEll細胞(TE11-hFasL-AS)中;TE11-hFasL-AS細胞FasL mRAN及蛋白的錶達水平均顯著下降(P＜0.01);與TE11-hFasL-AS細胞混閤培養後,U937細胞凋亡率明顯低于未轉染組(P＜0.01).結論 成功構建瞭人FasL反義RNA重組逆轉錄病毒錶達載體,用該載體轉染的TE11細胞中FasL的錶達水平明顯受抑,為Fas/FasL參與的體內許多病理進程的機製研究及臨床應用提供實驗基礎.
목적 채용반의RNA기술,구건인FasL반의RNA중조역전록병독재체.이FasL표체양성적인식관암세포주TE11위모형,연구반의RNA중조역전록병독표체재체대세포FasL적조단작용.방법 장인FasL전기인서렬적DNA편단반향삽입역전록병독pLXSN질립상적Xho Ⅰ화BamH Ⅰ위점간,건립중조질립pL(FasL-AS)SN.장pL(FasL-AS)SN도입포장세포PA317중,경G418사선후수획배양상청,전염TE11세포,건립TE11-hFasL-AS세포계.용PCR기술검측pL(FasL-AS)SN중목적기인FasL적삽입급기재TE11세포중적정합;용RT-PCR법검측TE11세포경중조병독감염전후FasL mRAN표체량적변화;채용류식세포의검측TE11화TE11-hFasL-AS세포FasL적표체급기대U937세포조망적유도.결과 장pL(FasL-AS)SN전염TE11세포후,FasL반의RNA이정합지TEll세포(TE11-hFasL-AS)중;TE11-hFasL-AS세포FasL mRAN급단백적표체수평균현저하강(P＜0.01);여TE11-hFasL-AS세포혼합배양후,U937세포조망솔명현저우미전염조(P＜0.01).결론 성공구건료인FasL반의RNA중조역전록병독표체재체,용해재체전염적TE11세포중FasL적표체수평명현수억,위Fas/FasL삼여적체내허다병리진정적궤제연구급림상응용제공실험기출.
