CAJ | 학술논문

Bmi-1是一种转录抑制子,属于Polycomb家族成员之一.Bmi-1基因在调控正常或白血病干细胞的自我更新中起着至关重要的作用.缺乏Bmi-1表达的急性髓系白血病细胞遭遇了增殖阻止和表现了分化和凋亡的征兆,这些发现导致有人提议和认为Bmi-1在白血病治疗中可作为潜在靶点.本研究探讨靶向针对Bmi-1的短发夹RNA(shRNA)对人慢性髓系白血病K562细胞功能的影响.采用RNA干扰技术,构建靶向针对Bmi-1的shRNA真核表达载体,利用脂质体lipofactamine 2000将shRNA真核表达载体转染入K562细胞中,经G418(400 μg/ml)筛选得到抗性克隆.用PCR和Western blot分别检测转染shRNA后K562细胞中Bmi-1的mRNA和蛋白水平的变化;以MTT法检测干扰组、对照组和未转染组细胞间的增殖情况;以集落形成实验测定3组间集落形成能力.结果表明:在设计的4个shRNA片段中,有1个片段显示显著的抑制效果.该shRNA转染K562细胞后,在mRNA水平上Bmi-1的表达明显下调,Western blot在蛋白水平上也证实了Bmi-1表达显著下调.MTT法和集落形成实验显示了干扰组、时照组和未转染组细胞3者间的增殖能力没有显著差异.结论:抑制Bmi-1的表达并不能减少K562细胞的增殖,这提示了可能存在其它一些平行的信号通路在细胞转化中起重要作用,而且可能独立于Bmi-1的过表达.Bmi-1在慢性髓系白血病的转化中起着次要的作用.
Bmi-1시일충전록억제자,속우Polycomb가족성원지일.Bmi-1기인재조공정상혹백혈병간세포적자아경신중기착지관중요적작용.결핍Bmi-1표체적급성수계백혈병세포조우료증식조지화표현료분화화조망적정조,저사발현도치유인제의화인위Bmi-1재백혈병치료중가작위잠재파점.본연구탐토파향침대Bmi-1적단발협RNA(shRNA)대인만성수계백혈병K562세포공능적영향.채용RNA간우기술,구건파향침대Bmi-1적shRNA진핵표체재체,이용지질체lipofactamine 2000장shRNA진핵표체재체전염입K562세포중,경G418(400 μg/ml)사선득도항성극륭.용PCR화Western blot분별검측전염shRNA후K562세포중Bmi-1적mRNA화단백수평적변화;이MTT법검측간우조、대조조화미전염조세포간적증식정황;이집락형성실험측정3조간집락형성능력.결과표명:재설계적4개shRNA편단중,유1개편단현시현저적억제효과.해shRNA전염K562세포후,재mRNA수평상Bmi-1적표체명현하조,Western blot재단백수평상야증실료Bmi-1표체현저하조.MTT법화집락형성실험현시료간우조、시조조화미전염조세포3자간적증식능력몰유현저차이.결론:억제Bmi-1적표체병불능감소K562세포적증식,저제시료가능존재기타일사평행적신호통로재세포전화중기중요작용,이차가능독립우Bmi-1적과표체.Bmi-1재만성수계백혈병적전화중기착차요적작용.