CAJ | 학술논문

RRM (RNA recognition motif)是RNA结合蛋白中广泛存在的一种保守结构域.从构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选得到一条含有RRM保守结构域的cDNA,命名为Bmrrm(GenBank登录号:DQ534196).Bmrrm基因全长 1 086 bp,开放阅读框大小为 894 bp,编码297个氨基酸残基,蛋白理论分子质量 33.2 kD,等电点9.69,预测的三级结构由2个α螺旋和4个β折叠组成.将该基因的PCR扩增产物于原核表达载体pET-28a( + )中表达后经 SDS-PAGE检测,在 36 kD处的特异性蛋白条带与预期值相符,重组蛋白以可溶的形式表达.将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA检测效价大于1∶6 400.采用荧光定量PCR方法对家蚕卵、5龄幼虫、蛹、蛾4个发育时期以及5龄幼虫各组织中Bmrrm的mRNA转录水平进行检测比较,发现在蛹期和5龄幼虫生殖腺、表皮中的转录水平较高.采用免疫印迹方法在家蚕的卵期、5龄幼虫、蛹期,以及5龄幼虫的生殖腺、表皮、脂肪体中检测到BmRRM蛋白有明显表达,但在蛾期及5 龄幼虫的其他组织中未检测到该蛋白.以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞化学实验,BmRRM蛋白在整个细胞周期主要分布于细胞核,仅少量分布于细胞质.初步推测BmRRM蛋白参与蚕体内RNA前体的剪接、细胞定位及维持稳定等转录后调控过程.
RRM (RNA recognition motif)시RNA결합단백중엄범존재적일충보수결구역.종구건적가잠용cDNA문고중사선득도일조함유RRM보수결구역적cDNA,명명위Bmrrm(GenBank등록호:DQ534196).Bmrrm기인전장 1 086 bp,개방열독광대소위 894 bp,편마297개안기산잔기,단백이론분자질량 33.2 kD,등전점9.69,예측적삼급결구유2개α라선화4개β절첩조성.장해기인적PCR확증산물우원핵표체재체pET-28a( + )중표체후경 SDS-PAGE검측,재 36 kD처적특이성단백조대여예기치상부,중조단백이가용적형식표체.장순화적중조단백면역신서란대백토제비다극륭항체,ELISA검측효개대우1∶6 400.채용형광정량PCR방법대가잠란、5령유충、용、아4개발육시기이급5령유충각조직중Bmrrm적mRNA전록수평진행검측비교,발현재용기화5령유충생식선、표피중적전록수평교고.채용면역인적방법재가잠적란기、5령유충、용기,이급5령유충적생식선、표피、지방체중검측도BmRRM단백유명현표체,단재아기급5 령유충적기타조직중미검측도해단백.이가잠Bm5세포진행면역세포화학실험,BmRRM단백재정개세포주기주요분포우세포핵,부소량분포우세포질.초보추측BmRRM단백삼여잠체내RNA전체적전접、세포정위급유지은정등전록후조공과정.