CAJ | 학술논문

研制纳米晶胶原基骨(nHAC)/血管内皮生长因子(VEGF)缓释支架,了解VEGF体外缓释效果及对人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)成骨诱导后粘附、增殖的影响,为骨组织工程寻求一种新型复合支架材料.利用生物学方法将VEGF负载于nHAC,制备具有VEGF缓释效果的复合支架;hMSCs经体外培养、扩增、成骨诱导后种植于VEGF缓释支架上行体外增殖.分为四组:实验组A:nHAC、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、肝索(heparin,HP)和VEGF(nHAC-FN-HP-VEGF);对照组B:nHAC、FN和VEGF(nHAC-FN-VEGF);对照组C,nHAC、HP和VEGF(nHAC-HP-VEGF);对照组D:nHAC和VEGF(nHAC-VEGF).通过检测支架材料上VEGF的释放量和持续时间,及种植细胞后细胞的黏附率、不同时间点(3、7、10、14 d)支架材料中细胞数、碱性磷酸酶活性以及扫描电镜观察细胞在材料上的生长状况,比较分析不同复合支架材料对细胞粘附、增殖的影响.人第三代MSCs 经诱导培养14 d后,碱性磷酸酶细胞化学染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色均为阳性;实验组A的VEGF缓释量最高,持续时间最长(可达14 d),细胞黏附率最高,为61.8%;各组支架中的细胞数量均随培养时间延长而增长,实验组A的细胞数增加较快,与相同时间点其他各组材料中细胞数差异有显著性(P<0.05);各时间点细胞碱性磷酸酶活性表达实验组最高,差异亦有显著性(P<0.05).电镜打描发现4组材料上均有细胞生长,实验组A的细胞增殖、分化状况明显好于其他组.hMSCs经诱导培养后可具有成骨细胞特性,hHAC-FN-HP-VEGF缓释支架具有较好的VEGF缓释效果,能显著提高细胞的粘附和增殖,可作为较理想的新型复合支架应用于骨组织工程.
연제납미정효원기골(nHAC)/혈관내피생장인자(VEGF)완석지가,료해VEGF체외완석효과급대인골수간충질간세포(human mesenchymal stem cells,hMSCs)성골유도후점부、증식적영향,위골조직공정심구일충신형복합지가재료.이용생물학방법장VEGF부재우nHAC,제비구유VEGF완석효과적복합지가;hMSCs경체외배양、확증、성골유도후충식우VEGF완석지가상행체외증식.분위사조:실험조A:nHAC、섬유련접단백(fibronectin,FN)、간색(heparin,HP)화VEGF(nHAC-FN-HP-VEGF);대조조B:nHAC、FN화VEGF(nHAC-FN-VEGF);대조조C,nHAC、HP화VEGF(nHAC-HP-VEGF);대조조D:nHAC화VEGF(nHAC-VEGF).통과검측지가재료상VEGF적석방량화지속시간,급충식세포후세포적점부솔、불동시간점(3、7、10、14 d)지가재료중세포수、감성린산매활성이급소묘전경관찰세포재재료상적생장상황,비교분석불동복합지가재료대세포점부、증식적영향.인제삼대MSCs 경유도배양14 d후,감성린산매세포화학염색、Ⅰ형효원면역형광염색균위양성;실험조A적VEGF완석량최고,지속시간최장(가체14 d),세포점부솔최고,위61.8%;각조지가중적세포수량균수배양시간연장이증장,실험조A적세포수증가교쾌,여상동시간점기타각조재료중세포수차이유현저성(P<0.05);각시간점세포감성린산매활성표체실험조최고,차이역유현저성(P<0.05).전경타묘발현4조재료상균유세포생장,실험조A적세포증식、분화상황명현호우기타조.hMSCs경유도배양후가구유성골세포특성,hHAC-FN-HP-VEGF완석지가구유교호적VEGF완석효과,능현저제고세포적점부화증식,가작위교이상적신형복합지가응용우골조직공정.