蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2011年
2期
325-329
,共5页
陈蔚%付凡%唐顺明%汪生鹏%黄金山%赵巧玲%沈兴家
陳蔚%付凡%唐順明%汪生鵬%黃金山%趙巧玲%瀋興傢
진위%부범%당순명%왕생붕%황금산%조교령%침흥가
人瘦素蛋白%Bac-to-Bac杆状病毒表达系统%重组杆状病毒%融合蛋白%家蚕
人瘦素蛋白%Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統%重組桿狀病毒%融閤蛋白%傢蠶
인수소단백%Bac-to-Bac간상병독표체계통%중조간상병독%융합단백%가잠
瘦素(leptin)蛋白由肥胖基因编码,对人体能量代谢等多种生理过程起着重要的调节作用.利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人瘦素蛋白基因(lep)克隆到杆状病毒转移栽体pFastBacHTb,并转化E.coli DH10Bac,获得重组杆粒Bacmidlep,然后转染家蚕BmN细胞,获得重组杆状病毒.用SDS-PAGE和Western blotting方法在感染重组病毒的家蚕BmN细胞检测到大小约22kD的蛋白条带,与预期的人瘦素蛋白分子质量相符.给家蚕5龄起蚕注射重组病毒液后的4～5 d出现发病症状,RT-PCR检测发病家蚕的血液中有lep基因转录,并通过SDS-PAGE和Western blotting检测到大小为22kD的人瘦素蛋白的表达.研究结果表明,利用Bac-to-Bac表达系统能够获得含有人瘦素蛋白基因的重组杆状病毒,并且目的蛋白能在家蚕细胞及幼虫体内表达.
瘦素(leptin)蛋白由肥胖基因編碼,對人體能量代謝等多種生理過程起著重要的調節作用.利用Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統,將人瘦素蛋白基因(lep)剋隆到桿狀病毒轉移栽體pFastBacHTb,併轉化E.coli DH10Bac,穫得重組桿粒Bacmidlep,然後轉染傢蠶BmN細胞,穫得重組桿狀病毒.用SDS-PAGE和Western blotting方法在感染重組病毒的傢蠶BmN細胞檢測到大小約22kD的蛋白條帶,與預期的人瘦素蛋白分子質量相符.給傢蠶5齡起蠶註射重組病毒液後的4～5 d齣現髮病癥狀,RT-PCR檢測髮病傢蠶的血液中有lep基因轉錄,併通過SDS-PAGE和Western blotting檢測到大小為22kD的人瘦素蛋白的錶達.研究結果錶明,利用Bac-to-Bac錶達繫統能夠穫得含有人瘦素蛋白基因的重組桿狀病毒,併且目的蛋白能在傢蠶細胞及幼蟲體內錶達.
수소(leptin)단백유비반기인편마,대인체능량대사등다충생리과정기착중요적조절작용.이용Bac-to-Bac간상병독표체계통,장인수소단백기인(lep)극륭도간상병독전이재체pFastBacHTb,병전화E.coli DH10Bac,획득중조간립Bacmidlep,연후전염가잠BmN세포,획득중조간상병독.용SDS-PAGE화Western blotting방법재감염중조병독적가잠BmN세포검측도대소약22kD적단백조대,여예기적인수소단백분자질량상부.급가잠5령기잠주사중조병독액후적4～5 d출현발병증상,RT-PCR검측발병가잠적혈액중유lep기인전록,병통과SDS-PAGE화Western blotting검측도대소위22kD적인수소단백적표체.연구결과표명,이용Bac-to-Bac표체계통능구획득함유인수소단백기인적중조간상병독,병차목적단백능재가잠세포급유충체내표체.
