生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
4期
76-83
,共8页
李俊毅%李想%褚庆华%吕蓉%张舒亚%潘良文%黄新%朱水芳
李俊毅%李想%褚慶華%呂蓉%張舒亞%潘良文%黃新%硃水芳
리준의%리상%저경화%려용%장서아%반량문%황신%주수방
PCR%RT73%标准分子%品系特异性检测%实时荧光PCR
PCR%RT73%標準分子%品繫特異性檢測%實時熒光PCR
PCR%RT73%표준분자%품계특이성검측%실시형광PCR
针对目前转基因产品检测标准物质缺乏的难题,构建适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子pEASY-RT73.其包含转基因油菜RT73品系3'端侧翼序列,油菜内标准基因HMG和PEP片段.对其在定性和定量检测中的适用性进行了实验室内部验证,结果表明,标准分子pEASY-RT173高度特异于转基因油菜RT73品系.以标准分子为标准品的普通PCR扩增中,3个目标片段的检测下限(LOD)均为10拷贝.实时荧光PCR检测的LOD均为25拷贝,定量下限(LOQ)均为50拷贝.以标准分子为标准品构建的标准曲线反应效率介于0.96-1.02间,相关系数均大于0.999.分别以PEP和HMG为内标准基因对5个盲样的测试结果显示,测量值与设定值间偏差(Bias)介于-14.13%-14.29%间,SD小于0.20,RSD小于18.0%.因此,标准分子pEASY-RT73可很好地替代植物来源阳性标准品用于转基因油菜Rt73及其来源产品品系特异性检测.
針對目前轉基因產品檢測標準物質缺乏的難題,構建適于轉基因油菜RT73品繫特異性檢測的標準分子pEASY-RT73.其包含轉基因油菜RT73品繫3'耑側翼序列,油菜內標準基因HMG和PEP片段.對其在定性和定量檢測中的適用性進行瞭實驗室內部驗證,結果錶明,標準分子pEASY-RT173高度特異于轉基因油菜RT73品繫.以標準分子為標準品的普通PCR擴增中,3箇目標片段的檢測下限(LOD)均為10拷貝.實時熒光PCR檢測的LOD均為25拷貝,定量下限(LOQ)均為50拷貝.以標準分子為標準品構建的標準麯線反應效率介于0.96-1.02間,相關繫數均大于0.999.分彆以PEP和HMG為內標準基因對5箇盲樣的測試結果顯示,測量值與設定值間偏差(Bias)介于-14.13%-14.29%間,SD小于0.20,RSD小于18.0%.因此,標準分子pEASY-RT73可很好地替代植物來源暘性標準品用于轉基因油菜Rt73及其來源產品品繫特異性檢測.
침대목전전기인산품검측표준물질결핍적난제,구건괄우전기인유채RT73품계특이성검측적표준분자pEASY-RT73.기포함전기인유채RT73품계3'단측익서렬,유채내표준기인HMG화PEP편단.대기재정성화정량검측중적괄용성진행료실험실내부험증,결과표명,표준분자pEASY-RT173고도특이우전기인유채RT73품계.이표준분자위표준품적보통PCR확증중,3개목표편단적검측하한(LOD)균위10고패.실시형광PCR검측적LOD균위25고패,정량하한(LOQ)균위50고패.이표준분자위표준품구건적표준곡선반응효솔개우0.96-1.02간,상관계수균대우0.999.분별이PEP화HMG위내표준기인대5개맹양적측시결과현시,측량치여설정치간편차(Bias)개우-14.13%-14.29%간,SD소우0.20,RSD소우18.0%.인차,표준분자pEASY-RT73가흔호지체대식물래원양성표준품용우전기인유채Rt73급기래원산품품계특이성검측.
